RIPA 裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA 裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的 Western、IP 等。
RIPA 的本意是 Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA 裂解液的配方有很多种,根据其 裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。
RIPA 裂解液(强)的主要成分为 50mM Tris (pH 7.4),150mM NaCl,1% Triton X-100,1% sodium deoxycholate,0.1% SDS,以及 sodium orthovanadate,sodium fluoride,EDTA,leupeptin 等多种抑制剂,可以有效抑制蛋白降解。
用 RIPA 裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用 BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。 由于含有较高浓度的去垢剂,不能用 Bradford 法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
保存方法:
-20℃ 一年
运输条件:
冰袋
注意事项:
1. RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下,可以直接离心取上清用于后续实验;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。
2. 需自备 PMSF。
3. 裂解样品的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。
4. 可能需要通过一些预实验来摸索*佳的适合您实验条件的裂解液。
5. 为取得*佳的使用效果,尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。
6. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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