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Cat. Number
E22504S
Chemical Name
E22504S 重组EcoRI限制性内切酶,无动物源
Storage condition
-20 ℃保存
References

EcoRI, ADCF 经过基因工程重组、能够在 5~15分钟内精确完成DNA 切割,适用于质粒 DNA、PCR产物或基因组 DNA 等的快速酶切。EcoRI, ADCF 具有如下特点:5~15分钟内即可完成酶切;良好的酶活冗余度,轻松应对底物过量或困难模板酶切。上海惠诚生物提供EcoRI限制性内切酶不含动物源性相关组分。


Cat.No.: E22504S

产品名称:

重组EcoRI限制性内切酶,无动物源


英文名称:

EcoRI, ADCF


产品组成:

组分规格
EcoRI, ADCF5000U
10×酶切Buffer2×1 ml


识别位点:

5'...G ↓ A A T T C...3'
3'...C T T A A ↑ G...5'


建议反应条件: 

1× 酶切Buffe; 37℃温育。


最适反应温度:

37℃


失活条件:

80℃ 温育 20 min。


活性定义:

1 活性单位 (U) 是指在 50 μl 反应体系中,37℃ 1 h 内完全酶切 1 μg λDNA 所需的酶量。


反应时间:

可在 5~15 min 内完成反应


保存条件:

-20 ℃保存


用途:

质粒 DNA、PCR 产物或基因组 DNA 等的快速酶切。


使用方法:

DNA 快速酶切流程 

① 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系:

image.png

a. DNA 底物中应不含苯酚、氯仿、乙醇、EDTA、洗涤剂或高浓度盐,否则将会影响 EcoRI, ADCF 酶活性;甲基化的 DNA 会抑制某些限制性内切酶酶切反应。 

② 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀(切勿涡旋),然后瞬时离心以收集挂壁液滴; 

③ 37℃温育 15 min~1 h,一般推荐 5 U~10 U 酶 /μg DNA、10 U~20 U 酶 /μg 基因组 DNA,温浴 1 h,如需过夜酶切反应,请将酶量调整至 1U; 

④ 80℃温育 20 min 即可使酶失活,停止反应,或者通过吸附柱或苯酚 / 氯仿纯化终止反应; 

⑤反应体系中加入的酶体积不应超过总体积的 10%,避免酶中过多的甘油引起星号活性 ; 

⑥限制性内切酶存储缓冲液中的添加剂 ( 例如甘油、盐 ) 与底物溶液中的污染物 ( 例如盐、EDTA 或乙醇等 ) 相同,反应体积越小,酶切反应抑制 效应越强; 

⑦小体系推荐加样体系

image.png

不同 DNA 中的酶切位点数量:

LM3~{Y~87J7I10BPCYFNQ0X.png

甲基化修饰影响:

H52SRLEI{8HVWA_~}LY@}4R.png

在不同反应缓冲液中的活性:

image.png

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