上海惠诚生物脂质体的CHO瞬转表达培养基_上海惠诚生物生物试剂,标准品,仪器设备,耗材,一站式服务

服务热线：13917250134「同微信」

您的位置：首页>>生命科学>>细胞培养>>上海惠诚生物脂质体的CHO瞬转表达培养基

产品中心

/ Products Classification 点击展开+

Cat. Number

YYTrans.K03

Chemical Name

上海惠诚生物脂质体的CHO瞬转表达培养基

Qty 1

References

基于脂质体的CHO瞬转表达培养基

上海惠诚生物提供的CHO 瞬转表达基础培养基（Basal Medium）与补料培养基（Feed Medium）是完全化学成分限定（Chemically Defined），均不含血清、水解物及任何动物来源的成分，适合于不同亚型中国仓鼠卵巢细胞（CHO-K1 和 CHO-S 细胞）的高密度悬浮培养，可实现重组蛋白和抗体的高水平表达：培养 7 天表达量在500mg/L 左右，14 天表达量 2000mg/L 左右，部分可达 3g/L 以上。

上海惠诚生物提供的 CHO 细胞瞬转表达培养基已完成美国 DMF 登记（DMF039790），更有力的支持客户需求。

产品描述

名称	备注	货号	规格	谷氨酰胺	葡萄糖	适用细胞
Trans CD05	初始培养基	YYCD05.001	1 L	含	6 g/L	ExpiCHOS, K1 等
FM02AB	补料培养基	YYFM02AB.02	200 mL	不含	80 g/L
CHO enhancer	表达增强剂	YYEnhancer.001	5 mL	不含
Trans8	转染试剂	YYTrans8.001	7 mL	不含

推荐使用说明

步骤	使用方法
细胞传代	0.3 e6 cells/mL 接种，3 天传代一次，当细胞倍增时间不低于对照培养基时认为细胞完全适应新培养基，进入下一步骤；
转染前一天	密度调整到 2e6 cells/mL
转染当天	以 20mL 培养体积为例（其他培养体积，相关试剂需要按体积折算） 1：转染当天用新鲜培养基稀释细胞密度至~6e6 cells/mL (采用离心换液方法更佳)； 2：将 50ug 质粒（即质粒总量 2.5ug/mL 左右）滴加到培养基中; 3: 缓慢滴加 140 uLTrans8（即 7.0uL/mL）至培养基中，边滴加边混合，使混合物能均匀扩展； 4: 摇瓶放入摇床中，培养时间记为 Day0, 转染结束；
质粒	双质粒：轻轻: 重链=1.1:1；；推荐分别 1.3ug/mL 和 1.2ug/mL;Trans8: 7.0ul/mL 二轻一重三质粒：0.6:0.6:1; 推荐分别 0.7 ug/mL，0.7 ug/mL，1.2 ug/mL，Trans8: 7.0ul/mL 一轻二重三质粒：1.2:0.6:0.6; 推荐分别 1.4 ug/mL，0.7 ug/mL，0.7 ug/mL，Trans8: 7.0ul/mL 对于难表达的轻或重链可适当提高含量，推荐轻链或重链总使用量不低于 1.0ug/mL;
补料培养	1：转染后~24h 补加 0.3%的 CHO enhancer （仅此一次）和 9%的 FM02AB 及 6g/L 的葡萄糖，并降温至 32℃培养； 2：之后 Day 5 和 Day9: 每 4 天补加一次 9%的 FM02AB （若只培养 6-7 天，Day5 不需要补料）; 3：活力≤60%或按既定时间即可培养结束；
温度及其他参数	1：初始 37℃，转染~24 时降温至 32℃； 2：摇床转速 120rpm, 50mm 振幅（重要参数，转速低或振幅低会影响溶氧导致产酸，降低表达量）， 5-8% CO2； 3：摇瓶装液量推荐 15~20%；

产品运输及存储

运输：常温或冷链运输；

存储：2~8℃，干燥、避光保存；

有效期：基础培养基干粉：2 年；

基础培养基液体：1 年；

补料培养基干粉：2 年；

补料培养基液体：1 年（开封后建议在 3 个月内使用完）。

应用范围

宥艺生物培养基可用于 CHO 细胞冻存、复苏、传代、高密度强化工艺培养及灌流培养，可实现

细胞快速生长，维持细胞高活率及蛋白该表达。

使用指南

细胞冻存

1．准备处于对数生长期状态较好的细胞，且细胞活率在 90%以上；

2．检测活细胞密度，计算所需的冻存培养基体积，计算最终细胞密度 1~1.5×10 7 cells/mL；

3．准备好所需的冻存培养基：90%基础培养基+10% DMSO，2~8℃冷藏保存；

4．设置离心力 200×g，离心 5 min，用冻存培养基重新悬浮细胞至冻存体积；

5．将悬浮细胞等分保存至适宜规格的细胞冻存管中；

6．将细胞冻存管置于程序降温盒中，按照降温标准进行降温；

7．将细胞转移到液氮罐中保存。

细胞复苏

1．提前打开水浴锅，并设置温度至 36.5℃~37.0℃；

2．将细胞从液氮罐中移出后，快速在水浴锅中融化冷冻的细胞（＜3 min）；

3．将冷冻管中的细胞液全部转移到 125 mL 含有 30 mL 预温过的基础培养基的摇瓶中；

4．置于 36.5~37.0℃，5~8% CO 2 ，转速 120 rpm（轨道振幅 50 mm）的摇床中培养；

5．细胞至少传代 2 次，待细胞完全复苏且活率在 90%以上，可按计划进行后续操作。

细胞传代

1．将基础培养基放入 36.5~37.0℃条件下预热 20 min；

2．检测活细胞密度，按接种密度为 0.3×10 6 cells/mL 的最终传代体积，计算所需种子液量；

3．无菌转移所需量的种子液，添加至含所需体积的已预热的基础培养基的摇瓶中；

4．将摇瓶放入温度 36.5~37.0℃，120 rpm（振幅 50 mm）（摇瓶底面积增大，需减小摇床转速），

5%~8% CO 2 的细胞培养摇床中进行培养；

5．每 3 天用新鲜的培养基按上述步骤进行传代培养。