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Cat. Number

Trans PEI CHO

Chemical Name

上海惠诚生物PEI的CHO瞬转表达培养基

Qty 1

References

基于PEI的CHO瞬转表达培养基

上海惠诚生物提供的CHO 瞬转表达基础培养基（Basal Medium）与补料培养基（Feed Medium）是完全化学成分限定（Chemically Defined），均不含血清、水解物及任何动物来源的成分，适合于不同亚型中国仓鼠卵巢细胞（CHO-K1 和 CHO-S 细胞）的高密度悬浮培养，可实现重组蛋白和抗体的高水平表达：培养 7 天表达量在 500mg/L 左右，14 天表达量 1000mg/L 左右，部分可达 2g/L 以上。

上海惠诚生物提供 CHO 细胞瞬转表达培养基已完成美国 DMF 登记（DMF039790），更有力的支持客户需求。

产品描述

名称	备注	谷氨酰胺	葡萄糖	生长因子	适用细胞
TransCHO	初始培养基	含	6 g/L	不含	CHO K1, CHOS 等
CHO FM02AB	补料培养基	不含	80 g/L	不含
CHO enhancer	表达增强剂	不含
Trans PEI	转染试剂	0.5mg/mL

Trans PEI转染试剂是一种分子量为40 kd的阳离子聚合物，它能与核酸形成复合物，并使该复合物进入哺乳动物细胞。可广泛适用于常见细胞系，如CHO-K1、CHO-S、 HEK293、HEK293T、 Hep G2、Hela、COS-1、COS-7、NIH/3T3和SF9等。该试剂即使在有血清存在的情况下，它仍然能高效的将核酸导入细胞。Trans PEI培养基可用于蛋白/抗体瞬时表达、腺相关病毒、慢病毒、疫苗、诊断试剂等领域，采用高密度强化工艺培养及灌流培养，可获得更高的表达量或滴度。

Trans PEI转染试剂具有如下优点：

1.优越的转染效率

2.重组蛋白的高表达水平

3.更强的稳定性（-20℃保存2年，2-8℃保存6个月）

4.低细胞毒性，易于操作

5.可提供GMP级别

6.10mL/支 0.5 mg/mL

推荐使用说明

步骤	使用方法
细胞传代	0.3 e6 cells/mL 接种，3 天传代一次，当细胞倍增时间不低于对照培养基时认为细胞完全适应新培养基，进入下一步骤；
转染前一天	密度调整到 2e6 cells/mL
转染当天	以 20mL 培养体积为例（其他培养体积，相关试剂需要按体积折算） 1：用新鲜培养基稀释细胞密度至 6e6 cells/mL; 2: 用 1mL TransCHO 培养基稀释 320uLTrans PEI（即终使用量 8.0 ug/mL），并混合均匀； 3：将 32ug 质粒（即 1.6ug/mL）与加入步骤 2 中混合均匀，并孵育 15~20min ; 4: 缓慢滴加上述混合物至培养基中，边滴加边混合，使混合物能均匀扩展； 5: 摇瓶放入摇床中，培养时间记为 Day0, 转染结束
补料培养	1：转染后~24h 左右补加 0.3%的 CHO enhancer （仅此一次）和 8%的 CHO FM02AB，并降温至32℃培养； 2：之后每 4 天补加一次 8%的 CHO FM02AB，葡萄糖按需添加（通常 Day6 和 Day9 分别添加 4g/L即可）； 3：活力≤60%即可培养结束；
温度及其他参数	1：初始 37℃，转染 8-24h 时降温至 32℃； 2：摇床转速 120rpm, 50mm 振幅，5-8% CO2；

产品运输及存储

运输：常温或冷链运输；

存储：2~8℃，干燥、避光保存；

有效期：基础培养基干粉：2 年；

基础培养基液体：1 年；

补料培养基干粉：2 年；

补料培养基液体：1 年（开封后建议在 3 个月内使用完）。

应用范围

上海惠诚生物提供的培养基可用于 CHO 细胞冻存、复苏、传代、高密度强化工艺培养及灌流培养，可实现

细胞快速生长，维持细胞高活率及蛋白该表达。

使用指南

细胞冻存

1．准备处于对数生长期状态较好的细胞，且细胞活率在 90%以上；

2．检测活细胞密度，计算所需的冻存培养基体积，计算最终细胞密度 1~1.5×10 7 cells/mL；

3．准备好所需的冻存培养基：90%基础培养基+10% DMSO，2~8℃冷藏保存；

4．设置离心力 200×g，离心 5 min，用冻存培养基重新悬浮细胞至冻存体积；

5．将悬浮细胞等分保存至适宜规格的细胞冻存管中；

6．将细胞冻存管置于程序降温盒中，按照降温标准进行降温；

7．将细胞转移到液氮罐中保存。

细胞复苏

1．提前打开水浴锅，并设置温度至 36.5℃~37.0℃；

2．将细胞从液氮罐中移出后，快速在水浴锅中融化冷冻的细胞（＜3 min）；

3．将冷冻管中的细胞液全部转移到 125 mL 含有 30 mL 预温过的基础培养基的摇瓶中；

4．置于 36.5~37.0℃，5~8% CO 2 ，转速 120 rpm（轨道振幅 50 mm）的摇床中培养；

5．细胞至少传代 2 次，待细胞完全复苏且活率在 90%以上，可按计划进行后续操作。

细胞传代

1．将基础培养基放入 36.5~37.0℃条件下预热 20 min；

2．检测活细胞密度，按接种密度为 0.3×10 6 cells/mL 的最终传代体积，计算所需种子液量；

3．无菌转移所需量的种子液，添加至含所需体积的已预热的基础培养基的摇瓶中；

4．将摇瓶放入温度 36.5~37.0℃，120 rpm（振幅 50 mm）（摇瓶底面积增大，需减小摇床转速），

5%~8% CO 2 的细胞培养摇床中进行培养；

5．每 3 天用新鲜的培养基按上述步骤进行传代培养。