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Cat. Number
HC80202-06
Chemical Name
​Cas14a检测系统用双标记探针(DNA Biotin和FAM双标记)
References

Cas14a核酸酶是一种内切核酸酶,其在tracrRNA:crRNA(或sgRNA)的引导下,特异结合并切割靶标ssDNA,且无需PAM位点。相比于其他的Cas蛋白,Cas14蛋白的分子量普遍较小(400-700aa);与Cas12类似,Cas14a也可以结合靶标核酸并激活其ssDNA反式切割活性,从而被应用于靶标核酸的分子检测;与Cas12不同的是,Cas14a只能结合ssDNA靶标,因此经过扩增富集的靶标核酸需使用T7核酸外切酶进行处理,且其中一条扩增引物需要使用磷硫酰化修饰以确保T7核酸外切酶仅切割其中一条链,从而留下ssDNA靶标链以用于Cas14a介导的分子检测。


DNA探针的标记方法较成熟,有多种方法可供选择,如缺口平移法、随机引物法、PCR标记法等,能用于同位素和非同位素标记。

DNA探针技术又称分子杂交技术,是利用DNA分子的变性、复性以及碱基互补配对的高度精确性,对某一特异性DNA序列进行探查的新技术。DNA探针是利用同位素、生物素等标记的特定DNA片断,该片断可大至寄生虫基因组DNA,小至20个碱基。当DNA探针与待测的非标记单链DNA(或RNA)按碱基顺序互补结合时,以氢健将2条单链连接而形成标记DNA-DNA(或标记DNA-RNA)的双链杂交分子。将未配对结合的核苷酸溶解后用检测系统(放射自显影或酶检测等)检测杂交反应结果。由于DNA分子碱基互补的精确性,单连DNA探针仅与样品中变性处理的DNA单链出现配对杂交,由此决定了探针的特异性;用放射性同位素(如32P)或生物素标记探针,使杂交试验同时具有高度的敏感性。


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