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| Cat. Number | E00903 |
| Chemical Name | E00903 Rase HII（核糖核酸酶 HII） Ribonuclease HII |
| Storage condition | -20 ℃保存 |
| References | Rase HII（核糖核酸酶 HII） Ribonuclease HII 核糖核酸酶 HII (RNase HII) 为核糖核酸内切酶，适用于在双链 DNA 内部切刻核糖核酸的 5 末端，产生 5 磷酸和 3 羟基末端。RNase HII 还可以在冈崎片段的RNA 部分进行多处切割。 RNaseHII酶通过切割核糖核苷酸DNA 5'端, 将RNA从RNA-DNA杂交体中裂解。核糖核酸酶HII具有连接核糖核酸酶活性，在RNA-DNA连接处最后一个核糖核酸肽的5'端切割RNA-DNADNA和RNA-DNARNA双链体。
Cat.No.: E00903 产品名称： RNase HII（核糖核酸酶 HII） 英文名称： Ribonuclease HII 种属： Pyrococcus kukulkanii 用途: 用于在双链 DNA 内部切刻核糖核酸的 5 末端，产生 5 磷酸和 3 羟基末端。 保存条件： 冰袋运输。 -20℃保存，6个月稳定；-70℃长期保存，一年稳定。建议分装保存，避免反复冻融。
酶活定义： 1 单位指 1X ThermoPol 反应体系中,37℃条件下,30 分钟产生与切刻 100pmol 人工合成双链RNA 底物相同的荧光信号所需的酶量。该合成双链底物在荧光探针/淬火对的淬火域附近含有单个核糖核苷。
核糖核酸酶HII反应条件: 反应条件：1X 反应缓冲液 [10 mM KCl, 20 mM Tris-HCl, 10 mM (NH4)2SO4, 2mM MgSO4, 0.1% Triton X-100 (pH 8.8, 25℃) ]。37℃ 温育。 Buffer 成分：20 mM Tris-HCl,100 mM NaCl,1 mM DTT,1 mM EDTA,50%Glycerol。 灭活：与 0.1% SDS 一起温育足以灭活 RNase HII。
产品特点: 1. 重组酶 2. 除去杂交到 poly(dT) 上的 mRNA poly(A) 3. 在 cDNA 第二链合成时除去 mRNA 4. 无核酸内切酶、核酸外切酶和 RNase 污染。 核糖核酸酶HII(RNase HII)操作步骤: (一)获得目的基因 1、通过PCR方法：以含目的基因的克隆质粒为模板,按基因序列设计一对引物(在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点),PCR循环获得所需基因片段。 2、通过RT-PCR方法：用TRIzol法从细胞或组织中提取总RNA,以mRNA为模板,逆转录形成cDNA第一链,以逆转录产物为模板进行PCR循环获得产物。 (二)构建重组表达载体 1、核糖核酸酶HII(RNase HII)载体酶切：将表达质粒用限制性内切酶(同引物的酶切位点)进行双酶切,酶切产物行琼脂糖电泳后,用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。 2、PCR产物双酶切后回收，在T4DNA连接酶作用下连接入载体。 (三) 获得含重组表达质粒的表达菌种 1、 将连接产物转化大肠杆菌DH5α，根据重组载体的标志(抗Amp或蓝白斑)作筛选，挑取单斑，碱裂解法小量抽提质粒，双酶切初步鉴定。 2、 测序验证目的基因的插入方向及阅读框架均正确，进入下步操作。否则应筛选更多克隆，重复亚克隆或亚克隆至不同酶切位点。 3、 以此重组质粒DNA转化表达宿主菌的感受态细胞。 (四)诱导表达 1、 核糖核酸酶HII(RNase HII)挑取含重组质粒的菌体单斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃过夜培养。 2、按1∶50比例稀释过夜菌，一般将1ml菌加入到含50mlLB培养基的300ml培养瓶中，37℃震荡培养至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大约需3hr)。 3、取部分液体作为未诱导的对照组，余下的加入IPTG诱导剂至终浓度0.4mM作为实验组，两组继续37℃震荡培养3hr。 4、分别取菌体1ml, 离心12000g×30s收获沉淀，用100μl 1%SDS重悬，混匀，70℃10min。 5、离心12000g×1min，取上清作为样品，可做SDS-PAGE等分析。
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