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Cat. Number
HTRF 激素检测试剂盒
Chemical Name
cisbio HTRF 激素检测试剂盒,代谢疾病研究检测
References

素(Hormone)是由内分泌腺产生的化学物质,随着血液输送到全身,控制身体的生长、新陈代谢、神经信号传导等。

皮质醇也可称为“可的松”或“氧化可的松”是由肾上腺在应激反应中分泌产生的主要糖皮质激素,在血液中以游离形式存在或者与皮质醇结合蛋白 (cortisobinding protein,CBG)结合,主要的功能包括调节糖代谢脂肪代谢、血压以及压力抑制等。

醛固酮(Aldosterone)是一种增进肾脏对于离子及水分子再吸收作用的类固醇类激素(盐皮质激素家族),主要作用于肾脏,进行钠离子及水分子的再吸收。

雌二醇(Estradiol,E2)是卵巢分泌的类固醇激素。是主要的雌性激素,负责调节女性特征、附属性器官的成熟和月经-排卵周期,促进乳腺导管系统的产生。

孕酮是由卵巢黄体分泌的一种天然孕激素,在体内对雌激素激发过的子宫内膜有显著形态学影响,为维持妊娠所必需。

前列腺素与特异的受体结合后在介导细胞增殖、分化、凋亡等一系列细胞活动以及调节雌性生殖功能和分娩、血小板聚集、心血管系统平衡中发挥关键作用。

地诺前列酮为天然前列腺素(PG),对各期妊娠子宫均有收缩作用,但各期妊娠子宫对PGE2 的敏感性不一致,足月子宫反应最为敏感。

睾酮的生理作用包括影响胚胎发育、刺激生殖器生长和第二性征的出现、维持生精作用、影响代谢以及促进红细胞生成。

上海惠诚生物提供cisbio HTRF 激素检测试剂盒包括醛固酮、皮质醇、雌二醇、孕酮、前列腺素、E2、睾酮试剂盒。

以HTRF 皮质醇检测试剂盒为例。


实验原理

HTRF 皮质醇检测是基于单克隆抗体的竞争性免疫测定。d2 标记的皮质醇和样品中游离的皮质醇同时竞争 Eu3+穴状化合物标记的皮质醇抗体的结合位点(见图 15)。当样品中游离的皮质醇含量越高时,d2-皮质醇与抗体结合的越少,因而 HTRF@信号越小,反之,当样品中的皮质醇含量越低时,HTRF信号越强。HTRF 信号与样品中皮质醇的含量呈反比。


订购信息

产品名称产品规格产品货号产品规格产品货号
Aldosterone Kit500 tests64ALDPEG10000 tests64ALDPEH
Cortisol Kit500 tests62CRTPEG10000 tests62CRTPEH
Estradiol Kit500 tests62ESTPEG10000 tests62ESTPEH
Progesterone Kit500 tests6FPROPEG10000 tests6FPROPEH
Prostaglandin E2 Kit500 tests62P2APEG10000 tests62P2APEH
Testosterone Kit500 tests64TESPEG10000 tests64TESPEH


产品特点

  • 可检测复杂样品如血清和全细胞。

  • 可进行细胞和生化检测

  • 易于实现自动化和高通量筛选 (HTS)

  • 基于单克隆抗体检测

  • 易于微型化到<10 p 的体系

  • 与皮质酮的交叉反应很低:0.9%的交叉反应


产品应用

  • 可以在复杂的基质中如肝脏微粒体,全细胞和血清进行皮质醇定量检测

  • 检测 11B-轻类固醇脱氢酶 (11B-HSD1)的活性,包括天然的、重组的和微粒体中的11B-HSD1

  • 该检测非常稳定,可作为 FP 和 ELISA的替代方案

  • 细胞裂解液中皮质醇的释放试验


实验流程

细胞刺激后只需要与 HTRF 检测试剂一起育2小时,即可读数。检测还可与与纯化的 11BHSD1 酶一起进行检测。

HTRF 皮质醇实验操作包括两步:刺激步骤和检测步骤 (见图16)。

细胞实验的刺激步骤:用化合物刺激细胞(或者微粒体)。

酶反应的刺激步骤:将微粒体或者纯化好的酶与 NADPH,皮质酮和待测化合物一起孵育。

检测步骤:依次加入 d2 标记的皮质醇和穴状化合物标记的皮质醇单抗,孵育 2小时后读取荧光信号。


产品性能


应用实例

检测 11B-HSD1 活性

在384孔板中,微粒体 11B-HSD1 (0.2 mg/mL)用 NADPH (200pM)) 和皮质(160 nM)刺激,分别计算甘梭 (Carbenoxolone) 和草 (Gycyrrhetinic acid)对皮质酮转化皮质萨的抑制率。甘珀酸和甘卓酸的IC50 分别为 0.33 和 0.31uM,结果见图 18(来白 Tokuda C et al.SBS 9thAnnual Conference. September 2003,Portland(USA))


图18.Glycyrrhetinic acid 和 Carbenoxolone 对微粒体 11B-HSD1 活性的抑制曲线

比较甘珀酸 ((Carbenoxolone,CBX) 对微粒体和细胞中 11B-HSD1 的抑制作用

皮质酮与细胞或微粒体以及不同浓度的 CBX 一起孵育。绘制皮质醇浓度曲线,计算IC50。在抑制曲线中,对于人微粒体和 C2C12 肌小管细胞中的 11B-HSD1,CBX 显示了相似的强抑制作用在微粒体和细胞 11B-HSD1中CBX的IC50 分别为319nM 和281nM,见图19。(Cho Y Kim CCheon C,Analytical Biochemistry 392 (2009) 110-116)

图19.甘珀酸(Carbenoxolone,CBX) 对微粒体和细胞中 11B-HSD1 活性的抑制作用



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