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| Cat. Number | 细胞因子检测标准品 |
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| Chemical Name | Cisbio HTRF 细胞因子检测标准品，炎症研究检测试剂 |
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| Qty 1 |
20000tests |
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| References | 细胞因子是由免疫系统细胞以及其他类型细胞主动分泌的一类小分子可溶性蛋白质与多肤 (图 1),是除免疫球蛋白和补体之外的又一类免疫分子，包括淋巴因子、干扰素、白介素、肿瘤坏死因子趋化因子和集落刺激因子等。它是免疫系统细胞之间，以及免疫系统细胞与其他类型细胞间联络的核心，能改变分泌细胞自身或其他细胞的行为或性质，通过与细胞特异的膜受体而起作用。细胞因子的主要生物学作用有:1) 抗感染、抗肿瘤作用，如FN、TNF 等:2免疫调节作用，如IL-1、IL-2、IL-5、IFN 等:3) 刺激造血细胞增殖分化，如 M-CSF、G-CSF、IL-3 等。4)参与和调节炎症反应，如:L-1、IL6、TNF 等。细胞因子共分六类:白细胞介素、干扰素、肿瘤坏死因子、集落刺激因子、生长因子和趋化因子。 订购信息
实验原理 HTRF细胞因子检测是基于双抗体夹心法，包括两个单克隆抗体(MA)：标记的抗细胞因子抗体 MAb1和XL665标记的抗细胞因子抗体 MAb2。MAb1和 MAb2分别与细胞因子结合，发生能量共振转移，产生荧光信号，荧光信号与细胞因子的浓度成正比。 图 2.HTRF细胞因子检测原理 产品特点
产品应用
实验流程 HTRE细胸因子检测方法可检测细胞上清液或者全细胸，两个抗体在检测步骤中可预先混合后一起加入。实验步骤可以是一步法或者两步法 (见图 3)。 一步法(基于细胞):将标记抗体与细胞、化合物一起孵育，整个实验在同一块板子中进行。两步法(基于上清液)细胞用化合物刺激后，将上清液转移至检测板中，添加 HTRF 检测试剂检测细胞因子。 产品性能 应用实例 IL6 和IL8基因的表达由 NFkB 和 TNF 以及 IL1 信号通路来驱动(图 4)。用小分子药物或者 siRNAs 阻断这些通路，用 HTRF IL6 和 IL8 检测方法，得到L6和 IL8 分泌量减少的结果，可以对这些信号通路中所涉及的基因和化学抑制剂的作用和特点进行详细的研究。HTRFIL6和IL8 试剂盒已经在 Hela细胞(贴壁细胞)、THP1(悬浮细胞) 以及原代人外周血淋巴细胞 (PBL)中进行了验证，在几个小时内即可对这些细胞因子完成时间进程和剂量反应的研究。(来自H.Niggli and al. International Cytokine Societymeeting. October 2004, San Juan (Puerto Rico)) 图5显示了分别基于细胞和上清液的 HTRF 细胞因子检测:TNFa (panel A)，IFNy (panel B),IL1B (panel C)，和IL6 (panel D)。实验过程: 用应的 HTRF试剂进行细胞因子定量。将细胞从每孔 1,562 个细胞到 100,000 个细胞铺板于 96 孔板，用10 g/mL 的 LPS 刺激细胞，诱导细胞生成IL1B、IL6、TNFa。然后，用1ng/mL聚丙酸甲(PMA) 和 500 ng/mL伊屋诺霉素与细胞共培养，刺激产生IFNY。细胞刺激在 37C 进行，并过夜。在基于细胞的检测过程中，加入 100 u 氟化钟(KF)后读数。在基于上清液的检测过程中，转移 5u 细胞上清液到检测板中与 HTRF”抗体孵育一段时间后读数。数据显示在相应的细胞密度条件下，细胞和上清液两种方法检测得到的细胞因子浓度相近，表明细胞的存在不会改变检测性能。当每孔超出 6.250 个细胞时浓度超出检测范围，无法对IL6水平(Panel D)进行定量。 |
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