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| Cat. Number | 64CTLA80PEG/64CTLA80PEH |
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| Chemical Name | Cisbio Human CTLA4/CD80 biochemical binding assay |
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| Qty 1 |
500tests |
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| Qty 2 | 1000tests |
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| Storage condition | 将试剂盒存储在≤-60°C。在适当的储存条件下，试剂在到期日之前是稳定的标签上有说明。 |
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| References | CTLA4(细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4)，也被称为CD152，是T细胞表达的免疫反应的抑制剂。CTLA4和CD28(刺激检查点)共享相同的配体，即CD80 (B7.1)和CD86 (B7.2)， CTLA4对两者表现出比CD28更强的亲和力，从而形成有效的配体结合竞争。尽管CTLA4可以在所有T细胞上找到，但它主要表达在Treg(调节性T细胞)上，在那里它参与了它们对免疫反应的抑制。 HTRF CTLA4 / CD80结合试验旨在测量CD80和CTLA4之间的相互作用。采用均相时间分辨荧光(HTRF)技术，使测定简单、快速化合物和抗体阻滞剂在高通量格式的表征。 技术原理 如图1所示，使用标记的anti-Tag1检测CD80与CTLA4之间的相互作用铕(HTRF供体)和d2标记的anti-Tag2 (HTRF受体)。当供体和受体产生抗体时由于CD80和CTLA4的结合而靠近，供体抗体触发的兴奋荧光共振能量转移(FRET)向受体抗体，而受体抗体在665海里。这种特异性信号与CTLA4 / CD80相互作用的程度成正比。因此，复合的或抗体阻断CTLA4 / CD80相互作用会导致HTRF信号降低。 产品信息
贮存稳定性 将试剂盒存储在≤-60°C。在适当的储存条件下，试剂在到期日之前是稳定的标签上有说明。 一旦复溶，标记CD80和CTLA4原液可以冷冻，并且只能解冻一次。一旦解冻(或复溶)，抗标签溶液可以冷冻一次。为了避免冻结/解冻循环，建议将剩余的原液分配到一次性溶液中储存温度≤-60°C的塑料小瓶。 解冻的PPI铕检测缓冲液可以储存在2-8°C的场所。 试剂制备 试验开始前： •在指定的PPI铕检测缓冲液中制备试剂非常重要。使用不正确的缓冲区可能会影响试剂稳定性和化验结果。 •在室温下解冻冷冻试剂。 •使用前，让所有试剂加热到室温，然后均匀缓冲液。建议在此之前过滤缓冲区使用。 •标记蛋白溶液必须在单独的小瓶中准备-在分配之前不要预混标记溶液。 •抗标签溶液必须在单独的小瓶中准备，并可以在分配之前进行预混。 •化合物可以在PPI铕检测缓冲液中制备。我们建议在测试期间保持DMSO低于1%(20µL最后一卷) 准备原液: 请注意根据您所购买的试剂盒的说明准备原液和工作溶液。 准备TAG1-CD80和TAG2-CTLA4工作方案: 每个孔需要每个标签蛋白4µL。 制备抗tag1eu隐窝抗体和抗tag2d2试剂工作液: 每个孔需要5µL的抗标记给体和受体试剂。 制备CTLA4/CD80标准溶液: •每个孔需要2 μ L标准。 •为了消除任何标准粘连，我们建议在每次稀释之间更换尖端。 建议的标准稀释程序如下所示: •解冻CTLA4 / CD80标准原液，这产生高标准(标准7:2.5µM (2 500 000 pM))。 •使用高标准(Std 7)，使用5倍连续稀释制备标准曲线，如下所示: -将40 μ L的PPI铕检测缓冲液从Std 6分到Std 0 -将10 μ L标准品加入40 μ L PPI铕检测缓冲液中，轻轻混合，重复系列稀释标准方案:std6、std5、std4、std3、std2、std1 这将为分析物创建7个标准。Std 0是单独的PPI铕检测缓冲液 分析方案 在20 μ l最终体积中进行抑制试验的标准方案 板块图示例 数据分析 1. 计算每个单孔的受体和供体发射信号的比率 2. 计算% cv。然后可以从比率重复中计算出平均值和标准偏差。 结果 下面所示的数据不能代替在实验室中获得的数据，而应仅视为一个例子。 带有闪光灯的HTRF兼容阅读器上的读数。 请注意，不同HTRF®兼容阅读器的结果可能不同。 |
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