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| Cat. Number | P121662/P106390 |
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| Chemical Name | 奥浦迈培养基 P121662/P106390 液体/干粉 全新化学成分确定CHO细胞培养基，用于生物制药研发及生产 |
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| Qty 1 |
1000ml |
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| Qty 2 | 10L |
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| Storage condition | 2~8℃冷藏，干燥避光保存 |
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| References | VegaCHO 是完全化学成分确定（Chemically-defined）基础培养基，不含水解物、蛋白及任何动物来源的 成分，适合于不同亚型中国仓鼠卵巢细胞（CHO-K1、CHOZN、CHO DG44 和 CHO-S 细胞）高密度悬浮培养， 可实现重组蛋白和单克隆抗体的高水平表达。VegaCHO™基础培养基与全新一代高性能补料 AltairCHO™ Feed 或 VegaCHO™ Feed 联用，可支持细胞高密度生长及活率维持，实现更高水平的蛋白/抗体表达和质量。 订购信息： 基础培养基
高性能补料
超浓缩补料
细胞培养添加剂
应用范围 VegaCHO™ 可应用于 CHO 细胞复苏、传代以及高密度流加培养。该基础培养基适用于科研和基于细胞培养的大 规模生物制品的生产，但不可直接用于人体或作为药物使用。 储存运输方法 储存：2~8℃冷藏，干燥避光保存 运输：常温（液体）、冷藏（干粉） 液体培养基配制方法 VegaCHO培养基不含谷氨酰胺和碳酸氢钠。 1. 取最终配制体积 90%的超纯水，水温 25~35°C（注：一次性配制体积不低于 1L）； 2. 称量 21.00 g/L 干粉培养基，缓慢加入水中并搅拌，待粉末完全分散后，再继续搅拌 10 分钟，容器边缘残 留干粉应将其全部冲入； 3. 称量 2.22g/L 碳酸氢钠，加入水中并搅拌； 4. 缓慢加入 5N NaOH 调节 pH 到 8.3-8.5，搅拌 20-30 分钟，此时应完全溶解； 5. 缓慢加入 5N HCl 将 pH 调回至 7.0； 6. 加超纯水定容到最终配液体积，继续搅拌 5 分钟，测 pH，用 5N NaOH 或 5N HCl 将 pH 调至 7.0； 7. 取样测渗透压，加入 NaCl 调节渗透压至 280±10 mOsm/kg（渗透压计算公式：NaCl 添加量（g）= 配液 体积（L）×（280-检测值）/ 31.5）； 8. 继续搅拌 10 分钟，无菌过滤到合适容器。 干粉及液体培养基质量指标
培养条件 温度 37℃，湿度 80%，5~8%CO2 摇床设置：转速 110-150rpm（振幅 50mm） 细胞复苏 1. 在 37℃水浴中快速（＜2min）融化冷冻的细胞； 2. 将冷冻管中的细胞液全部转移到 125mL 含有 30mL 预温过的 VegaCHO™ 培养基的摇瓶中； 3. 放入 37℃，5~8% CO2，转速 110~130rpm（振幅 50mm），湿度 80%的摇床中培养； 4. 细胞至少传代 2 次，待其完全复苏，细胞倍增时间（Population Doubling Time，PDT）稳定后，可按计划 进行后续操作。 细胞传代 1. 将 VegaCHO TM培养基放入 37℃条件下预热 20-30min； 2. 取细胞密度≥1×10 6 cells/mL、活率≥90%、处于对数生长期中期的细胞进行传代； 3. 按接种密度为 0.5×10 6 ~ 1.0×10 6 cells/L 的最终传代体积，计算所需种子液量； 4. 无菌转移所需量的种子液，添加至含所需体积的已预热的 VegaCHO TM培养基的摇瓶中； 5. 将摇瓶放入温度 37℃，湿度 80%，转速 110~150rpm（振幅 50mm），5%~8%CO2的细胞培养摇床中进行培养； 6. 每 2~3 天用新鲜的培养基按上述步骤进行传代培养。 细胞驯化 直接接种法 1. 对于可以直接接种的细胞，可以从无血清培养基中直接接种到 VegaCHO™ 培养基中，接种密度参考传代步 骤，并需要依据具体情况而定。 2. 继续传代细胞，直到细胞稳定生长。 3. 传代几次后，细胞密度在接种的 3~4 天内达到 2×10 6 cells/mL 及以上、细胞活率＞90%，且倍增时间稳定， 此时可以认为细胞已被驯化成功。 梯度驯化法 1. 对于传统的生长在 5~10%血清或无血清的细胞，采用梯度驯化法，接种密度 3×10 5~4×10 5 cells/mL。 2. 监测细胞生长情况，直到细胞密度达到≥2×10 6 cells/mL。 3. 用 VegaCHO™培养基：原始培养基=25:75 的比例稀释细胞。直到这个比例的培养基细胞生长良好，再进一 步稀释培养。在接下来的每次操作中，提高 VegaCHO™ 培养基的比例，如下表所示。 4. 在完全使用 VegaCHO™ 培养基接种 3~4 天之后，活细胞计数应该至少达到 2×10 6 cells/mL，细胞活性≥ 85%。此时，细胞已经驯化到 VegaCHO™ 培养基中。
细胞冻存 1. 准备处于指数生长的中期，细胞活率＞90%，状态较好的细胞。 2. 测定活细胞密度，计算所需的冻存培养基体积，最终细胞密度＞1×10 7 cells/mL。 3. 准备所需的冻存培养基 90% VegaCHO™ 培养基+10%DMSO，4℃冷藏保存。 4. 400×g 离心 5 分钟，用冻存培养基重新悬浮细胞。 5. 根据项目具体需要，将悬浮液进行等分保存于适宜规格的冷冻管中。 6. 按照标准程序，对冷冻管进行自动或手工操作降温（每分钟降 1℃）。 7. 将细胞转移到液氮罐中保存。 相关推荐： 奥浦迈培养基 OPM-293 ProFeed HEK293 细胞无蛋白质补料 上海惠诚生物科技有限公司自2010年成立以来，一直致力于为客户提供试剂，仪器设备和耗材一站式服务，按照客户的研发、生产和质量控制环节整合各种资源，优化资源组合，为客户提供整体解决方案。 产品线包括：生命科学，分析化学，生化试剂和仪器耗材。 更多奥浦迈培养基请咨询！ 全国统一服务热线：021- 60496554 24小时手机服务: 13917250134（同微信）QQ：1715451510 Email：info@e-biochem.com |
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