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| Cat. Number | P081308-001 |
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| Chemical Name | 奥浦迈培养基P081308-001 OPM-CHO CD08 Medium液体培养基，用于CHO细胞悬浮培养与转染 |
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| Qty 1 |
1000ml |
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| Storage condition | 2~8℃冷藏，干燥避光保存 |
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| References | OPM-CHO CD08 是化学成分确定（Chemically-defined）的细胞培养基，不含水解物，不含生长因子及任 何动物来源的成分，专为中国仓鼠卵巢（CHO）细胞的生长和悬浮培养中的转染而开发。配制的培养基不含次黄 嘌呤和胸腺嘧啶，可用于二氢叶酸还原酶（DHFR）扩增系统；不含 L-谷氨酰胺，可用于谷氨酰胺合成酶系统； 不含酚红，可最大程度地减少酚红的类似雌激素的作用。该培养基与其配套的补料 OPM-CHO ProFeed 联用可提 高蛋白质产量。 订购信息 基础培养基
应用范围 OPM-CHO CD08 可应用于高密度悬浮细胞扩增以及流加培养。该培养基适用于科研和基于细胞培养的大规模生物 制品的生产，但不可直接用于人体或作为药物使用。 储存运输方法 储存：2~8℃冷藏，干燥避光保存 运输：常温（液体）、冷藏（干粉） 液体培养基配制方法 1. 取洁净的配制容器，建议一次性配制体积不低于 1L； 2. 加入最终配制体积 90%的超纯水或注射用水，水温控制在 25~35°C； 3. 称量 16.05 g/L 干粉培养基，缓慢加入水中搅拌 10 分钟； 4. 称量 2.22 g/L 碳酸氢钠，加入水中搅拌； 5. 缓慢加入 5N NaOH 调节 pH 到 8.3~8.5，搅拌 30 分钟，此时应完全溶解； 6. 缓慢加入 5N HCl 将 pH 调回至 7.0； 7. 定容到最终配液体积，继续搅拌 5 分钟，测 pH，用 5N NaOH 或 5N HCl 将 pH 调回至 7.0； 8. 取样测渗透压，加入 NaCl 调节渗透压至 285±10mOsm/kg（渗透压计算公式：NaCl 添加量（g）=配液体积 （L）*（285-检测值）/31.5）； 9. 继续搅拌 10 分钟，无菌过滤到合适容器，2~8℃避光保存。 干粉及液体培养基质量指标
培养条件 温度 37℃，湿度 80%，5~8% CO2 摇床设置：转速 110~150 rpm（振幅 50 mm） 细胞复苏 使用前将原始培养基和 OPM-CHO CD08 培养基预热至 37℃，补充 6mM L-谷氨酰胺。根据原始培养基方法回 收细胞。 细胞传代 1. 使用前将原始培养基和 OPM-CHO CD08 培养基预热至 37℃，并补充 6mM L-谷氨酰胺。 2. 每 2~3 天进行细胞传代，以保持细胞处于对数生长期的早期。 3. 接种的活细胞密度为(0.3~0.6)×10 6 cells/ml。 4. 当细胞密度达到(3~4)×10 6 cells/ml，细胞活力大于 95％（2~4 天）时，再次传代培养细胞。注意：保持种子 细胞处于对数生长期是非常关键的，不同类型的 CHO 细胞可能具有不同的对数生长期范围。 5. 重复上述步骤以保种或扩增细胞以进行转染和表达。 细胞驯化 在开始驯化程序之前，确保细胞活力≥95％并且生长速度处于对数中期。在 37℃，8％CO2 的培养箱中，以 125 rpm±5％转速孵育细胞。 直接接种法 1. 对于可以直接接种的细胞，可以从无血清培养基中直接接种到 OPM-CHO CD08 培养基中，接种密度参考传 代步骤，并需要依据具体情况而定。 2. 继续传代细胞，直到细胞稳定生长。 3. 传代几代之后，细胞密度达到 2×10 6 cells/ml、细胞活性≥85%时在 3~4 天内接种。此时，可以认为细胞 已被驯化成功。 梯度驯化法 如果使用直接驯化方法效果一般，请使用梯度驯化方法。使用前将原始培养基和 OPM-CHO CD08 培养基预热至 37℃，并补充 6mM L-谷氨酰胺。以下是一些要点： 1. 选择较低代的细胞，并确保细胞处于对数生长阶段。 2. 使用原始培养基复苏细胞，并继续使用原始培养基传代 2-3 代，以实现稳定的细胞生长。 3. 当细胞密度达到(3~4)×10 6 cells/ml 时，将细胞按 0.6×10 6 cells/ml 的密度接种到含有 1/3 体积的 OPM- CHO CD08 和 2/3 体积的原始培养基的培养基。 4. 当细胞密度达到(3~4)×10 6 cells/ml 且细胞活力大于 95％（3~4 天）时，将细胞以 0.5×10 6 cells/ml 接种 到含有 OPM-CHO CD08（2/3 体积）和原始培养基的（1/3 体积）的培养基。 5. 当细胞密度达到 3×10 6 cells/ml 且细胞活力大于 95％（3-4 天）时，将细胞接种（0.4×10 6 cells/ml）到 100％OPM-CHO CD08 培养基中。 6. 将细胞以 0.3×10 6 cells/ml 的密度接种在 OPM-CHO CD08 培养基中，并继续传代 2~3 代以实现稳定的细 胞生长。 注意：保持种子细胞处于对数生长期是非常关键的，不同类型的 CHO 细胞可能具有不同的对数生长期范围。 推荐的转染条件 推荐的转染条件 最佳转染条件应根据具体情况进行优化，并可能需要通过 DOE 方法确定。以下转染条件仅供参
推荐的表达和补料策略 转染 16-20h 后，将培养箱温度从 37℃调节至 32℃。 添加补料 OPM-CHO ProFeed 可提高蛋白质产量。 推荐的补料策略如下： 1. 转染后细胞复苏良好（存活率大于 90％）时，分别在转染后的 D1/D3/D5 添加 OPM-CHO ProFeed 补料， 补料量为初始培养体积的 7.5％。当葡萄糖≤3g/L 时，按 6g/L 的终浓度添加葡萄糖浓缩液。 2. 转染后细胞复苏不佳时（转染后细胞的倍增时间明显延长，或在第 1 天的存活率低于 90％），观察并根据 细胞复苏确定进料起点。 3. 在分泌表达中，活率≤60％时收获细胞。在细胞内表达系统和膜蛋白表达系统中，当活率≤85％时收获细胞。 上海惠诚生物科技有限公司自2010年成立以来，一直致力于为客户提供试剂，仪器设备和耗材一站式服务，按照客户的研发、生产和质量控制环节整合各种资源，优化资源组合，为客户提供整体解决方案。 产品线包括：生命科学，分析化学，生化试剂和仪器耗材。 更多奥浦迈培养基请咨询！ 全国统一服务热线：021- 60496554 24小时手机服务: 13917250134（同微信）QQ：1715451510 Email：info@e-biochem.com |
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