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| Cat. Number | P83059/P93059 |
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| Chemical Name | 奥浦迈培养基 P83059/P93059 OPM-CD TransCHO液体/干粉化学成分确定CHO细胞转染培养基，用于生物制药研发及生产 |
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| Qty 1 |
1000ml |
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| Qty 2 | 10L |
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| Storage condition | 2~8℃冷藏，干燥避光保存 |
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| References | OPM-CD TransCHO 是一种化学成分确定 (chemically defined)、无动物源组分的培养基，不含蛋白质、 生长因子、水解物或未知组成的成分，专为中国仓鼠卵巢（CHO）细胞的生长和悬浮培养中的转染而开发, 适合 于不同亚型中国仓鼠卵巢细胞（CHO-K1、CHO DG44 和 CHO-S 细胞）。配制的培养基不含次黄嘌呤和胸腺嘧啶， 可用于二氢叶酸还原酶（DHFR）扩增系统；不含 L-谷氨酰胺，可用于谷氨酰胺合成酶筛选系统；不含酚红，可最大程度地减少酚红的类似雌激素的作用。OPM-CD TransCHO 与补料 OPM-CHO ProFeed 联用可提高蛋白质产量。 订购信息： 基础培养基
高性能补料
应用范围 OPM-CD TransCHO 细胞培养基可应用于高密度悬浮细胞扩增以及流加培养。该基础培养基即适用于科研应用， 也适用于大规模生物药生产，但不可直接用于人体或作为药物使用。 储存运输方法 储存：2~8℃冷藏，干燥避光保存 运输：常温（液体）、冷藏（干粉） 液体培养基配制方法 1. 取最终配制体积 90%的超纯水，水温 25~35°C（注：一次性配制体积不低于 1L）； 2. 称量 19.83 g/L 干粉培养基，缓慢加入水中并搅拌 10 分钟； 3. 缓慢添加 5N NaOH 调节 pH 到 6.0，持续搅拌 20 分钟； 4. 称量 2.22 g/L 碳酸氢钠，加入水中并持续搅拌 10 分钟； 5. 缓慢添加 5N NaOH 调节 pH 到 7.0，持续搅拌 20 分钟； 6. 加超纯水校正到最终配液体积；用 NaCl 调节渗透压到 285±10 mOsm/kg（渗透压计算公式：NaCl 添加量（g） =配液体积（L）*（285-检测值）/31.5）； 7. 继续搅拌 10 分钟，无菌过滤到合适容器。 干粉及液体培养基质量指标
培养条件 温度 37℃，湿度 80%，5~8%CO2 摇床设置：转速 110~150rpm（振幅 50mm） 细胞复苏 使用前将原始培养基和 OPM-CD TransCHO 培养基预热至 37℃，补充 6mM L-谷氨酰胺。根据原始培养基方法回 收细胞。 细胞传代 1. 使用前将原始培养基和 OPM-CD TransCHO 培养基预热至 37℃，并补充 6mM L-谷氨酰胺。 2. 每 2~3 天进行细胞传代，以保持细胞处于对数生长期的早期。 3. 接种的活细胞密度为(0.3~0.6)×10 6 cells/ mL。 4. 当细胞密度达到(3~4)×10 6 cells/ mL，细胞活力大于 95％（2~4 天）时，再次传代培养细胞。 注意：保持 种子细胞处于对数生长期是非常关键的，不同类型的 CHO 细胞可能具有不同的对数生长期范围。 5. 重复上述步骤以保种或扩增细胞以进行转染和表达。 细胞驯化 在开始驯化程序之前，确保细胞活力≥95％并且生长速度处于对数中期。在 37℃，8％CO2的培养箱中，以 125r pm±5％转速孵育细胞。 直接接种法 1. 对于可以直接接种的细胞，可以从无血清培养基中直接接种到 OPM-CD TransCHO 培养基中，接种密度参 考传代步骤，并需要依据具体情况而定。 2. 继续传代细胞，直到细胞稳定生长。 3. 传代几代之后，细胞密度达到 2×10 6 cells/mL、细胞活性≥85%时在 3~4 天内接种。此时，可以认为细胞 已被驯化成功。 梯度驯化法 如果使用直接驯化方法效果一般，请使用梯度驯化方法。使用前将原始培养基和OPM-CD TransCHO 培养基预热 至 37℃，并补充 6mM L-谷氨酰胺。以下是一些要点： 1. 选择较低代的细胞，并确保细胞处于对数生长阶段。 2. 使用原始培养基复苏细胞，并继续使用原始培养基传代 2~3 代，以实现稳定的细胞生长。 3. 当细胞密度达到 (3~4)×10 6 cells/mL 时，将细胞按 0.6×10 6 cells/mL 的密度接种到含有 1/3 体积的 OPM-CD TransCHO 和 2/3 体积的原始培养基的培养基。 4. 当细胞密度达到 (3~4)×10 6 cells/mL 且细胞活力大于 95％（3~4 天）时，将细胞以 0.5×10 6 cells/mL 接 种到含有 OPM-CD TransCHO（2/3 体积）和原始培养基的（1/3 体积）的培养基。 5. 当细胞密度达到 3×10 6 cells/mL 且细胞活力大于 95％（3~4 天）时，将细胞接种（0.4×10 6 cells/mL）到 100％OPM-CD TransCHO 培养基中。 6. 将细胞以 0.3×10 6 cells/mL 的密度接种在 OPM-CD TransCHO 培养基中，并继续传代 2~3 代以实现稳定的 细胞生长。 注意：保持种子细胞处于对数生长期是非常关键的，不同类型的 CHO 细胞可能具有不同的对数生长期范围。 推荐的转染条件 转染条件应根据具体情况进行优化，并可能需要通过 DOE 方法确定。 以下转染条件仅供参考。
推荐的表达和补料策略 转染 16-20h 后，将培养箱温度从 37℃调节至 32℃。 添加补料 OPM-CHO ProFeed 可提高蛋白质产量。 推荐的补料策略如下： 1. 转染后细胞复苏良好（存活率大于 90％）时，分别在转染后的 D1/D3/D5 添加 OPM-CHO ProFeed 补料， 补料量为初始培养体积的 7.5％。当葡萄糖≤3g/L 时，按 6g/L 的终浓度添加葡萄糖浓缩液。 2. 转染后细胞复苏不佳时（转染后细胞的倍增时间明显延长，或在第 1 天的存活率低于 90％），观察并根据 细胞复苏确定进料起点。 3. 在分泌表达中，活率≤60％时收获细胞。在细胞内表达系统和膜蛋白表达系统中，当活率≤85％时收获细胞。 相关推荐： 奥浦迈培养基 OPM-293 ProFeed HEK293 细胞无蛋白质补料 上海惠诚生物科技有限公司自2010年成立以来，一直致力于为客户提供试剂，仪器设备和耗材一站式服务，按照客户的研发、生产和质量控制环节整合各种资源，优化资源组合，为客户提供整体解决方案。 产品线包括：生命科学，分析化学，生化试剂和仪器耗材。 更多奥浦迈培养基请咨询！ 全国统一服务热线：021- 60496554 24小时手机服务: 13917250134（同微信）QQ：1715451510 Email：info@e-biochem.com |
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