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| Cat. Number | His标签蛋白纯化介质(NTA) |
| Chemical Name | His标签蛋白纯化介质(NTA) |
| Qty 1 |
1ml |
| Qty 2 | 5ml |
| References | 1. 产品简介 His标签蛋白纯化介质适用于His标签融合蛋白的纯化，采用该产品可快速从细胞发酵液中提取His标签融合蛋白。 His标签蛋白纯化介质（NTA）以可以耐受还原剂的NTA为金属螯合配基，常规螯合Ni2+（常称为镍填料），亦可根据客户需要螯合Cu2+，Co2+，Zn2+等离子基团。 2. 产品特性
3. 应用 采用His标签蛋白纯化介质对His融合蛋白进行分离纯化的过程通常包括平衡、上样、淋洗、洗脱等步骤。 平衡：用5~10CV的平衡缓冲液平衡层析柱，至流出液电导和pH不变（与平衡液一致）。实际操作中，一般选用中性/弱碱性（pH 7~8）的高盐（0.15~1.0 M NaCl或其它中性盐）缓冲液。其中常用磷酸盐缓冲体系，如20 mM PB+0.5 M NaCl, pH 7.4。对于结合力较强的带组氨酸标记的蛋白质，平衡缓冲液中可加入低浓度（20~40 mM）的咪唑。 上样：样品缓冲液应尽可能与平衡液一致。固体样品可用平衡液溶解配制；低浓度样品溶液可用平衡液透析；高浓度样品溶液可用平衡液稀释。为了避免堵塞层析柱，样品应经离心或微滤处理。进料量根据介质的载量和料液中目标蛋白的含量计算。
为了减少杂蛋白在层析柱上的吸附，可在确保目标蛋白吸附的情况下适当增加样品缓冲液中的咪唑。对于包涵体蛋白，相应地可在平衡、上样和洗脱的缓冲液中加入8M 尿素或6M 盐酸胍。 淋洗：上样完毕后继续用平衡缓冲液淋洗至基线。 洗脱：洗脱一般有两种方式，一是采用竞争试剂，如咪唑（0~0.5M）、组氨酸（0~0.05M）、氯化铵（0~2M）等将蛋白质从柱子上置换下来；二是减小pH值，洗脱目标蛋白，大多数蛋白质在pH 4~6的范围内可被洗下来。用竞争试剂咪唑或减小pH值的方法洗脱蛋白质，金属离子仍结合在柱子上；若用竞争试剂组氨酸或氯化铵洗脱蛋白质，会将金属离子和蛋白质的复合物一起洗下来。 洗脱缓冲液中必须加入0.15~1.0 M NaCl以消除离子交换作用。梯度洗脱最好在起始平衡液的恒定pH下进行，可采用线性梯度或阶越式梯度洗脱。 4. 再生 介质使用5-10次（具体与样品特性、样品体积、金属离子等有关）后，或者鳌合其它金属离子前，需要进行再生处理。 1）脱Ni 用5-10倍体积的EDTA溶液（0.2M EDTA+0.5M NaCl, pH 7.0）清洗介质，然后用5-10倍体积的去离子水清洗以去除残留的EDTA。 2）清洗 采用5-10倍体积的0.5-1M NaOH（2M NaCl溶液或50%乙醇或者30%异丙醇）清洗介质，除去色素或者其他强吸附蛋白，然后用10-20倍体积的平衡缓冲液或去离子水清洗以去除残留溶液。 3）挂Ni 采用2-5倍体积的0.2M NiSO4溶液与介质混合搅拌4h，然后过滤。（亦可柱上清洗） 4）平衡 采用20-30倍体积的去离子水清洗介质，去除残留的Ni2+。如发现清洗液仍呈现蓝色，应继续清洗，直至蓝色消失。 采用2-5倍体积的20%乙醇清洗介质，结束后储存于4-8℃环境中。 |
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