产品简介：

Blue Native PAGE(BN-PAGE)是一种从生物样品（质膜，胞浆等）中分离蛋白质复合物的电泳技术。能分离

10kDa-10MkDa 范围内的蛋白质以及蛋白质复合物。

BN-PAGE 以考马斯亮蓝G-250 代替SDS 使蛋白质复合物带负电荷，根据各个不同复合物分子量不同从而在胶

中得到分离。这些复合物在胶中以蓝色条带形式呈现。样品用一些温和的去污剂如dodecylmaltoside(DM),Triton

X-100 和毛地黄皂苷(digitonin)等溶解，从而使复合物以近似天然的状态分离。

实验中若想进一步分析复合物各个亚基的成分，通常采用BN-PAGE 结合SDS-PAGE 的方式。

基本信息：

胶板尺寸：宽×高×厚度为98×84×4.1mm；

凝胶尺寸为：宽×高×厚度为81×74×1.5mm；

丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺的比例：29：1；

浓缩胶：4%，1.5cm；

凝胶厚度：1.5mm；

孔数：10 孔，15 孔；

最大上样量：60μL，30μL；

包装：10 片/盒。

使用说明：

1.样品处理

2.电泳

①将处理好的样品用微量进样器点在上样孔中

②倒入1X 阴极电泳液01 和1X 阳极电泳液

③插好电源，以恒压100V 开始电泳

④待样品跑过浓缩胶后，电压改为250V，之后可以慢慢增大，到样品最后跑完。控制电流在50mA 以内。

⑤待样品跑到凝胶的1/3 处更换阴极电泳液，将原来1X 阴极电泳液01 更换成1X 阴极电泳液02，这样可以

降低胶的背景。

3.固定和染色

当样品跑完整个凝胶后，剥胶，固定和染色。这个过程和普通的SDS-PAGE 一样。用固定液（20% ddH2O，40%甲醇，10%乙酸）固定30min 后，水洗4 次，15min 一次。然后在考染液中染色过夜。

4.脱色，扫描

染色过夜后，倒掉考染液，用双蒸水脱色，到背景十分干净为止，扫描。如果不要分析复合物各个亚基的组分，就可以直接拿Blue Native 胶切胶，酶解后质谱鉴定。若还想进一步分析复合物各个亚基的组成，则还要做二向SDS-PAGE。

二向SDS-PAGE 操作过程

1.制胶：根据实验需求选择合适浓度的SDS-PAGE

2.平衡：将BN 胶根据条带的位置切成长条，置于含有1%SDS，1%巯基乙醇溶液中平衡2h，水洗20min。

3.转移

先煮琼脂糖（0.05g 琼脂糖，10mL 电泳缓冲液，30μL 溴酚蓝），然后将平衡好的胶条摆在二向SDS 胶的浓缩胶胶面上，用压胶片把胶条压紧，使二者紧密结合，并保证两个胶面之间没有气泡，再向胶面上封一层琼脂糖。

4.跑胶

等琼脂糖凝固后，将玻璃板摆到电泳槽上，倒入电泳缓冲液，以25mA 恒流开始电泳。等样品跑过浓缩胶后，将电流改为45mA 直到电泳结束。

5.银染

①固定液（100mL 乙醇，25mL 乙酸，125mL 双蒸水）固定30min；

②将固定液倒掉，加入敏化液（0.5g 硫代硫酸钠，17g 乙酸钠，75mL 乙醇，最后定容至250mL）敏化30min；

③倒掉敏化液，加入双蒸水洗3 次，每次5min；

④倒掉水，加入银染液（0.625g 硝酸银加水至250mL）染色20min；

⑤倒掉染色液，水洗两次，每次1min；

⑥倒掉水，加入显影液（6.25g 碳酸钠，50μL 甲醛溶于250mL 水中），3-5min 以后即可看到结果；

⑦倒掉显影液，快速加入终止液（3.65g EDTA 溶于250mL 水中）终止20min；

⑧倒掉终止液，加入双蒸水洗胶面；

注意：每个步骤之间都要换干净手套，银染液配好后要避光。

6.扫描

产品保存和运输：

1.常温运输。

2.凝胶4-8℃贮存，可以存放2 个月。

3.请勿置于0℃以下，凝胶在0℃以下会冻凝，产生气泡和裂纹，凝胶报废。

拆胶：

1.先沿侧边胶处简单划一刀（或先将玻璃板侧边多余封胶材料去除）；

2.用刀在侧边胶处，沿着玻璃板和玻璃条的缝隙切开封胶材料（箭头处），轻轻打开玻璃板；

3.取胶时，需在凝胶和两侧玻璃条之间沿着玻璃条划一刀，防止取胶时发生粘连使凝胶破碎。

注意事项：

1.样品处理是整个实验的关键，样品处理最重要的是去污剂的浓度以及去污剂和蛋白的比例，这个通常需要摸索，设置不同的浓度以及比例，最后选择最佳的。

2.上样量不能太大，太大样品会沉积在上样孔中不能下来。上样量是根据上样孔的大小以及胶的厚度来决定的。

3.样品的盐离子浓度要非常低，否则会导致样品在上样孔中沉积。如果样品的盐离子浓度很高，首先必须脱盐。

4.每个孔上样的样品体积不能超过上样孔容积的4/5，所以必须控制样品的浓度，浓度太低需浓缩。

5.所有操作必须在冰上进行，保证复合物的完整性。

6.仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

7.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

玻璃胶盒兼容的电泳槽:

玻璃胶盒系列预制胶可以兼容大部分的mini SDS-PAGE 电泳槽，包括

a.Bio-Rad Mini-PROTEAN (II/3 /Tetra System)

b.Hoefer Mighty Small (SE 250/ SE 260/ SE 280)

c.Life Technology Novex Mini-Cell (请与万生昊天特制挡板配合使用)

d.北京六一DYCZ-25E、DYCZ-24K、DYCZ-24KS、DYCZ-24KF

e.君意东方JY-SCZ2+

f.天能VE180

g.或其它胶板宽度在10 厘米的电泳槽

在Life Technology Novex 电泳槽中的应用：

由于玻璃胶盒系列预制胶比Invitrogen NuPAGE 预制胶略薄，所以需要特制的挡板，使得该系列预制胶能够适用于Life Technology Novex 电泳槽。如有需要，请在订购本产品时告知。

在Bio-Rad 电泳槽中的应用：

Bio-Rad Mini-PROTEAN 系列电泳槽的U 型密封条顶部有突起结构，而万生昊天GLASS gel 系列预制胶的短玻板是凹形结构，因此该部位是平的，电泳前需将具有突起结构的密封条取出后反过来安装，是平滑面朝外，从而防止漏液（如下图所示）。另有厚度约为0.5mm 的塑料垫片，请根据您电泳槽的实际宽度进行相应的增加。

a.将Bio-Rad 电泳槽中的U 型密封条（如图绿色部分） 拉出，注意这时的密封条两端是有突起的，突起的这面为正面，无突起的为反面。

b.将密封条旋转180 度(正面朝里，反面朝外)，重新装回电泳槽中，注意把密封圈周边压实，防止发生漏液。

c.放置好预制胶进行正常的电泳操作即可。