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Cat. Number
HK21642-96S
Chemical Name
HK21642-96S 总糖含量测试盒(酶标板法)
Qty 1
100T/96S
References

糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一,也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。总糖也可称为碳水化合物,主要指具有还原性的葡萄糖,果糖,戊糖,乳糖和在测定条件下能水解为还原性的单糖的蔗糖,麦芽糖以及可能部分水解的淀粉,包括可溶性的单糖,二糖以及不溶性的淀粉,纤维素,几丁质等。


测定原理:
总糖酸水解为还原糖,在NaOH和丙三醇存在下,DNS试剂与还原糖共热后被还原成氨基化合物,在过量的NaOH碱性溶液中呈桔红色,在540nm处有zuì大吸收峰,以此测定样品中的总糖含量。


需自备的试剂和器材:

 1.可见分光光度计/酶标仪

 2.37℃恒温箱

 3.系列可调节移液器及吸头,一次检测样品较多时,最好用多通道移液器

 4.去离子水或蒸馏水


产品组成:

试剂名称 规格 保存条件
试剂R1液体 x1瓶2-8℃
试剂R2液体 x1瓶2-8℃
试剂R3液体 x1瓶2-8℃
标准品粉剂x1 支2-8℃


实验步骤:

一、试剂准备

标准品:临用前加1mL蒸馏水溶解为10mg/mL的葡萄糖标准品备用,2-8℃可保存两周。

二、样本处理

1、组织样本的处理:称取约0.1g样本于10mLEP管中,加入1mL 试剂R1,1.5mL蒸馏水,研磨匀浆,沸水浴30min,加入1mL试剂R2,涡旋混匀,用蒸馏水定容至10mL,8000g,25℃离心10min,取上清液待测。(注意稀释)。

2、血清(浆)、液体样本的处理:取0.1mL 血清(浆)于1mLEP管中,加入0.1mL试剂R1,0.15mL 蒸馏水,匀浆,沸水浴30min,加入0.1mL 试剂R2,涡旋混匀,用蒸馏水定容至1mL,8000g,25℃离心10min,取上清液待测。(注意稀释)。

三、测定步骤

1、酶标仪/分光光度计预热 30min 以上,调节波长至540nm,蒸馏水调零。

2、标准品准备

将标准品用蒸馏水按梯度进行稀释。标准液稀释可参考下表:

序号稀释前浓度(mg/mL)标准液体积(uL) 蒸馏水体积(uL)稀释后浓度(mg/mL)
11032168
1.6
2101009001.0
3116040
0.8
40.8100
1000.4
50.41001000.2
60.21001000.1

备注:实验中每个标准管需30uL标准溶液。

3、加样表

 试剂(uL) 空白管测定管标准管
 蒸馏水30--
样本-30-
标准品--30
试剂R330 3030
涡旋混匀,沸水浴 10min(盖紧,以防止水分散失),冷却至室温
蒸馏水180180180

涡旋混匀,在540nm下测定吸光值,分别记为A空白管、A测定管、A标准管。计算 △A测定=A测定管-A空白管、△A标准=A标准管-A空白管。标准曲线和空白管只需测1-2次。


四、总糖含量计算

1、标准曲线的绘制:

根据标准管的浓度(x,mo/mL)和吸光度△A标准(y,△A标准),建立标准曲线。根据标准曲线,将△A测定(y,△A测定)带入公式计算样本浓度(x,mg/mL)。

2、按样本质量计算

总糖(mg/g质量)=(x*V样总)÷W*稀释倍数=10*x÷W*稀释倍数

3、按血清(浆)、液体体积计算

总糖(mg/mL)=(x*V提)÷V样*稀释倍数=10*x*稀释倍数

V样总:样本体积总体积,10mL;

W:样本质量,g;

V提:液体或血清样本总体积,1mL;

V样:液体或

血清体积,0.1mL。


注意事项:

1、此试剂盒对千纤维素的分解程度无法达到100%。

2、如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。注意同步修改计算公式。


本试剂盒仅供科研使用!


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