服务热线
021-60498804
| Cat. Number | HK21639-24S |
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Chemical Name | HK21639-24S 总巯基测试盒(可见分光光度法) |
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Qty 1 |
50T/24S |
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| References | 生物体内巯基主要包括谷胱甘肽巯基和蛋白质巯基。前者不仅能够修复氧化损伤的蛋白质，而且参与活性氧清除，后者对于维持蛋白质构象具有重要作用。通过测定总巯基含量和GSH含量，能够间接测定蛋白质巯基含量。 检测原理： 需自备的试剂和器材： 1.可见分光光度计/酶标仪 2.37℃恒温箱 3.系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器 4.去离子水或蒸馏水 产品组成：
实验步骤： 注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 1. 动物、植物组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1：5~10 的比例（称取称取约0.1g 组织，加入1mL的提取液），冰浴匀浆，8000g，常温离心10min，取上清待测。 2. 血清，培养液：直接测定。若溶液有浑浊则离心后取上清进行测定。 二、试剂准备 标准品：10 mg 还原型谷胱甘肽（GSH）。临用前加入1.3 mL 蒸馏水，配制成25 μmol/mL，2-8℃保存两周。 三、测定步骤 1、分光光度计预热30min以上，调节波长至412nm，分光光度计蒸馏水调零。 2、标准液的稀释：将25μmol/mL标准溶液用蒸馏水稀释至0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625μmol/mL 的标准液，现用现配。 3、标准液稀释可参考下表：
备注：实验中每个标准管需200μL 标准溶液。 4、操作表
四、计算公式 1、标准曲线的绘制：根据标准管的浓度（y，μmol/mL）和吸光度ΔA标准（x，ΔA标准），建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA测定（x，ΔA测定）带入公式计算样本浓度（y，μmol/mL）。 2、总巯基含量计算： （1）按样本质量计算： 总巯基含量（μmol/g 质量）=y×V样总÷W=x÷W （2）按样本蛋白浓度计算： 总巯基含量（μmol/mg prot）=y×V样总÷（Cpr×V样总） （3）按血清、培养液体积计算： 总巯基含量（μmol/L）=y×V样÷（V样×0.001） V样总：加入提取液体积； V样：加入的样本体积； W：样本质量，g； Cpr：样本蛋白浓度， mg/mL； 0.001：单位换算系数，1mL=0.001L。 注意事项： 如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。注意同步修改计算公式。 本试剂盒仅供科研使用! |
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Copyright © 2022 上海惠诚生物科技有限公司
沪ICP备2021037845号-6
