HK21638-96S 总抗氧化能力(T-AOC)测试盒(酶标板法)_上海惠诚生物生物试剂,标准品,仪器设备,耗材,一站式服务

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Cat. Number

HK21638-96S

Chemical Name

HK21638-96S 总抗氧化能力(T-AOC)测试盒(酶标板法)

Qty 1

100T/96S

References

测定对象中各种抗氧化物质和抗氧化酶等构成总抗氧化水平。在生物学、医学和药学研究中常常检测血浆、血清、唾液、尿液等各种体液，细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液及各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力。

检测原理：
在酸性环境下，还原Fe3+-三吡啶三吖嗪(Fe3+-TPTZ)产生蓝色的Fe2+-TPTZ的能力反映了总抗氧化能力。

需自备的试剂和器材：

可见分光光度计/酶标仪

微量玻璃比色皿/96 孔板

恒温水浴锅

低温离心机

细胞超声破碎仪

研钵/匀浆器

浓硫酸

冰和蒸馏水

产品组成：

试剂名称	规格	保存条件
提取液	液体×1瓶	2-8℃
试剂R1	液体×1瓶	2-8℃
试剂R2	液体×1瓶	2-8℃
试剂R3	液体×1瓶	2-8℃
标准品	粉剂×1瓶	2-8℃

实验步骤：

一、样本处理（具体比例可以参考文献）

1、血清、血浆、唾液或尿液样本

血浆（制备时可以使用肝素或柠檬酸钠抗凝，不宜使用EDTA 抗凝）5000r/min 离心10min，取上清待测。血清、唾液或尿液样本直接用于测定，也可以-80℃冻存（不宜超过30d）后再测定。

2、细胞或细菌样本

收集细胞或细菌于离心管中。按照细胞或细菌数量（104）：提取液体积（mL）为500~1000:1 的比例，加入1.0mL 预冷的提取液（建议取500 万细胞，加入1mL 预冷的提取液），超声破碎细胞（功率200W，超声开3s，关9s，总时间3min），然后10000rpm，4℃离心10min，取上清置于冰上待测。

3、组织样本

按照组织质量（g）︰提取液体积（mL）为1︰5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 预冷的提取液）进行冰浴匀浆，然后10000rpm，4℃离心10min，取上清置于冰上待测。

二、试剂准备

1、提取液：使用前置于2-8℃冰箱或冰上预冷；

2、标准品：10 mg FeSO4·7H2O。临用前加入0.9 mL 蒸馏水，20μL 浓硫酸，配制成40 μmol/mL FeSO4 标准溶液备用；

3、混合液：将试剂一、试剂二、试剂三按7:1:1 的比例混合，现配现用，用多少配多少。使用前置于37℃水浴锅或37℃恒温培养箱中预热10min。

三、测定步骤

1、分光光度计或酶标仪预热30min 以上，调节波长至593nm，分光光度计用蒸馏水调零。

2、标准溶液的制备：将40 μmol/mL 标准溶液用蒸馏水稀释为0.15、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125、

0.00156μmol/mL 标准溶液备用。

3、标准液稀释可参考下表：

序号	稀释前浓度（μmol/mL）	标准液体积（μL）	蒸馏水体积（μL）	稀释后浓度（μmol/mL）
1	40	50	950	2
2	2	75	925	0.15
3	2	50	950	0.1
4	0.1	200	200	0.05
5	0.05	200	200	0.025
6	0.025	200	200	0.0125
7	0.0125	200	200	0.00625
8	0.00625	200	200	0.003125

备注：实验中每个标准管需100μL 标准溶液。

4、吸取100μL 标准溶液（蒸馏水作空白）加入100μL 试剂R2，充分混匀，反应10min，测定593nm 下的吸光度，计算ΔA 标准=A 标准-A 空白，此时Fe2+终浓度为0.075、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125、0.00156、0.00078

μmol/mL，标准曲线只需做1-2 次。

5、测定操作表

试剂名称(uL)	空白管	测定管
混合液	180	180
样本	-	6
蒸馏水	24	18
充分混匀，室温准确反应10min，吸取200μL 于微量玻璃比色皿/96 孔板，测定593nm 吸光值。计算ΔA测定= A 测定-A 空白，空白管只需测1-2 次。