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| Cat. Number | HK21636-96S |
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| Chemical Name | HK21636-96S 总胆固醇(TC)含量测试盒(酶标板法) |
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| Qty 1 |
100T/96S |
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| References | 总胆固醇（Total Cholesterol，TC）是指所有脂蛋白所含胆固醇的总和，包括游离胆固醇和胆固醇酯。 测定原理： 利用酯酶催化胆固醇酯水解生成游离胆固醇（FC）和游离脂肪酸（FFA），从而把胆固醇酯转化为FC；进一步利用胆固醇氧化酶催化FC氧化，生成4-胆甾烯酮和H2O2；最后利用过氧化物酶催化H2O2氧化4-氨基安替比林和酚，生成红色醌类化合物，其在500nm有特征吸收峰，其颜色深浅与TC含量成正比。 需自备的试剂和器材： 可见分光光度计/酶标仪 天平 低温台式离心机 水浴锅/恒温培养箱 微量玻璃比色皿/96孔板 研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪 可调式移液枪 EP管 蒸馏水 异丙醇 产品组成：
实验步骤： 一、样本处理(具体比例可以参考文献) 1.组织：按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液)进行冰浴匀浆。10000g，4°℃离心10min，取上清置冰上待测。 2.细菌/细胞：按照细胞数量(104个)：提取液体积(mL)为500~10001的比例(建议500万细胞加入1mL提取液)，冰浴超声波破碎细胞(功率300w，超声2秒，间隔3秒，总时间3min)；然后10000g，4℃离心10min取上清置于冰上待测。 3.血清(浆)等液体样本：直接测定。若有沉淀请离心后取上清待测。 二、试剂准备 1. 提取液：自备异丙醇。 2.标准品：10 mo 胆固醇，临用前加入 517uL提取液，振荡溶解，即为50umol/mL的胆固醇标准溶液，2-8℃可保存4周。 3.试剂R3：液体置于试剂瓶内EP管中。 4.工作液的配制：根据样本量将试剂R1：试剂R2：试剂R3按3mL：20uL：3uL(约16T)的比例配制工作液。现用现配。 三、测定步骤 1.可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至500nm，分光光度计蒸馏水调零。 2.标准溶液的稀释：将50umol/mL胆固醇标准溶液用提取液进行稀释得到2.5、2、1.25、0.625、0.3125、0.15625umol/mL的标准溶液备用。 3.标准溶液稀释可参考下表：
备注:实验中每个标准管需20uL标准溶液。 4.在1.5mLEP管/96孔板按下表步骤加样：
四、总胆固醇含量计算 1. 标准曲线的绘制： 根据标准管的浓度（x，μmol/mL）和吸光度ΔAy，，建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA测定（y，ΔA测定）带入公式计算样本浓度（x，umol/mL）。 2. 总胆固醇含量的计算： （1）按血清（浆）等液体体积计算： TC含量（μmol/dL）=x×100 （2）按样本蛋白浓度计算： TC含量（μmol/mg prot）=x×V提取÷（Cpr×V提取） （3）按样本质量计算： TC含量（μmol/g 质量）=x×V提取÷W （4）按细胞/细菌数量计算： TC含量(μmol/104 cell)=x×V提取÷500 100：单位换算系数，1dL=100mL； V提取：加入样本的提取液体积； W：样本质量，g； 500：细菌或细胞总数，500万。 注意事项: 1.如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者用提取液稀释样本后再进行测定。注意同步修改计算公式。 2.提取液中含有使蛋白变形的成分，故按蛋白浓度计算时需要重新提取蛋白进行测定。 本试剂盒仅供科研使用! |
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