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| Cat. Number | HK21630-48S |
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| Chemical Name | HK21630-48S 中性转化酶(NI)测试盒(酶标板法) |
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| Qty 1 |
100T/48S |
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| References | 蔗糖转化酶(Invertase，Ivr)催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖，是高等植物蔗糖代谢关键酶之一。根据最适 pH，将高等植物Ivr分为酸性转化酶(AI)和中性转化酶(NI)两种类型。中性转化酶NI主要存在于细胞质中，负责分解细胞质中蔗糖为果糖和葡萄糖。 中性转化酶NI 催化蔗糖分解产生还原糖，进一步与3,5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，在540nm 有特征光吸收，在一定范围内540nm 光吸收值与还原糖生成量成正比。通过光吸收增加速率来计算NI 活性。 需要的仪器，耗材: 1、可见分光光度计/酶标仪 2、台式离心机 3、可调式移液器 4、微量石英比色皿/96孔板 5、研钵、冰和蒸馏水。 产品组成：
实验步骤： 注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行 冰浴匀浆。12000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。 二、试剂准备 1、试剂R2：临用前加入试剂R1充分溶解备用；用不完的试剂 4℃保存； 2、标准品：10mg 葡萄糖，临用前加入 1mL 蒸馏水溶解，制备 10mg/mL 葡萄糖标准液备用。 三、测定步骤 1、分光光度计或酶标仪预热30min 以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。 2、标准品的制备：将标准液用蒸馏水稀释成2、1.5、1.0、0.5、0.25、0 mg/mL 葡萄糖标准液。 3、操作表：（在1.5mLEP管中依次加入下列试剂）
混匀，煮沸10min 左右（盖紧，以防止水分流失），流水冷却后充分混匀，取200μL 至微量玻璃比色皿或96孔板中，540nm 处记录各管吸光值A，ΔA测定=A测定-A 对照，ΔA标准=A标准-A 对照。 四、NI 活性计算 1、标准曲线的建立： 以各浓度下吸光值减空白管（浓度为0 mg/mL）的吸光度ΔA标准为 y 轴，葡萄糖浓度为 x 轴绘制标准曲线。根据标准曲线，将ΔA测定带入方程得到x（mg/mL）。 2、NI活性计算： （1）按样本蛋白浓度计算 单位定义：37℃每 mg 蛋白每分钟产生1μg还原糖定义为一个酶活性单位。 NI活性（U/mg prot）=(x×V1×1000)÷(V1×Cpr)÷T （2）按样本质量计算 单位定义：37℃每 g 组织每分钟产生1μg还原糖定义为一个酶活性单位。 NI活性（U/g 质量）=(x×V1×1000)÷(W×V1÷V2)÷T 1000：单位换算系数，1 mg/mL =1000μg/mL； V1：加入反应体系中样本体积； V2：加入提取液体积； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； W：样本质量，g； T：反应时间：30min。 注意事项： 1、如果加入试剂R3，煮沸10min后有混浊物出现，建议离心除去沉淀后，取上清测定吸光度； 2、如果吸光值大于1，可以用蒸馏水将样本稀释后测定（计算公式中乘以相应稀释倍数）。 3、由于提取液中含有一定浓度的蛋白（约1mg/mL），所以在测定样本蛋白浓度时需要减去提取液本身的蛋白含量。 本试剂盒仅供科研使用! |
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