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Cat. Number

HK21627-24S

Chemical Name

HK21627-24S 中性木聚糖酶测试盒(可见分光光度法)

Qty 1

50管/24S

References

木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物产生，能催化水解木聚糖，也被称为戊聚糖酶或半纤维素酶，可分解酿造或饲料工业中的原料细胞壁以及β-葡聚糖，降低酿造中物料的粘度，促进有效物质的释放，以及降低饲料中的非淀粉多糖，促进营养物质的吸收利用，因而广泛的应用于酿造和饲料工业中，中性木聚糖酶(NEX)一般分离自适生长pH为6-8的微生物。

测定原理：
中性木聚糖酶(NEX)在中性环境中催化木聚糖降解成还原性寡糖和单糖，在沸水浴条件下进一步与3,5-二硝基水杨酸发生显色反应，在540nm处有特征吸收峰，反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比，通过测定反应液在540nm吸光值增加速率，可计算中性木聚糖酶(NEX)活力。

需要的仪器，耗材:

1、可见分光光度计

2、台式离心机

3、可调式移液器

4、微量石英比色皿/96孔板

5、研钵、冰和蒸馏水。

产品组成：

试剂名称	规格	保存条件
缓冲液	液体x1瓶	2-8℃
试剂R1	液体x1瓶	2-8℃
试剂R2	液体x1瓶	2-8℃
标准品	粉剂x1支	2-8℃

实验步骤:

一、样本处理(具体比例可以参考文献)

1、细胞或微生物样本发酵液的制备:发酵液于8000rpm，4℃，离心15min，取上清，置于冰上待测。

2、组织:称取约0.1g组织，加入1mL缓冲液，冰上充分研磨。8000g，4℃离心 15min，取上清，置冰上待测。

3、酶干粉:称约 1mg，加缓冲液 1mL，震荡充分溶解。

二、试剂准备

标准品：10mg木糖。临用前加入667uL 蒸馏水配成100umol/mL的标准品溶液，2-8℃保存两周。

三、测定步骤

1、可见分光光度计预热30min 以上，调节波长至540nm，可见分光光度计蒸馏水调零。

2、标准液

取20uL100umol/mL木糖标准液，加入980uL蒸馏水，充分混匀，配制成2umol/mL的木糖标准液备用，现用现配。

备注：实验中每管需要200uL，为减小实验误差，故配制大体积。

3、将上清液/酶溶液用蒸馏水稀释十倍后置冰上待测(即取50uL上清液/酶溶液，加入450uL蒸馏水，充分混匀)。

加入试剂	对照管	测定管	标准管	空白管
样本(uL)	200	200	-	-
标准品(uL)	-	-	200	-
蒸馏水(uL)	-	-	-	200
缓冲液(uL)	300	300	300	300
试剂一(uL)	-	200	200	200
混匀，盖紧瓶盖，50℃水浴，反应30min，立即沸水浴10min灭活。(注意不要让盖子爆开，以免进水，改变了反应体系)
试剂一(uL)	200	-	-	-
试剂二(uL)	300	300	300	300
混匀，沸水浴显色5min(注意不要让盖子爆开，以免进水改变了反应体系)，冰浴冷却后尽快测量540nm波长下的吸光值A对照管、A测定管、A标准管、A空白管，计算ΔA测定=A测定管-A对照管，ΔA标准=A标准管-A空自管，空自管和标准管只需做1-2次。