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Cat. Number

HK21621-48S

Chemical Name

HK21621-48S 植物组织果糖含量测试盒(可见分光光度法)

Qty 1

50管/48S

References

果糖是一种为常见的己酮糖，是葡萄糖的同分异构体，以游离状态大量存在于水果的浆汁和蜂蜜中，能与葡萄糖结合生成蔗糖。果糖是甜的单糖，广泛应用于食品、医药、保健品生产中。

测定原理：
在酸性条件下果糖与间苯二酚反应，生成有色物质，在480nm下有特征吸收峰。

需要的仪器，耗材:

1、可见分光光度计

2、台式离心机

3、可调式移液器

4、微量石英比色皿/96孔板

5、研钵、冰和蒸馏水。

产品组成：

试剂名称	规格	保存条件
提取液	液体×1 瓶	2-8℃
试剂R1	液体×1 瓶	2-8℃
试剂R2	液体×1 瓶	2-8℃
试剂R3	液体×1 瓶	2-8℃
试剂R4	粉剂×1 瓶	常温

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

实验步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

称取约 0.1g 样本，常温研碎；加入 1mL 提取液，适当研磨后快速转移到有盖离心管中；置于 80℃水浴锅中 10min（盖紧，以防止水分散失），振荡 3~5 次，冷却至室温后，4000g，常温离心 10min，取上清；加入少量（约 2mg）试剂四，80℃脱色 30min（盖紧，以防止水分散失）；再加入 0.5mL 提取液，4000g，常温离心 10min，取上清液测定。

二、试剂准备

试剂R1：10mg 果糖。临用前加1mL 蒸馏水溶解，得到10mg/mL 的果糖标准液，2-8℃保存两周。

三、测定步骤

1、分光光度计预热30min 以上，调节波长至 480nm，分光光度计用蒸馏水调零。

2、试剂R1的稀释

取200μL 10mg/mL果糖标准液，加入300μL蒸馏水，充分混匀，配制成4mg/mL标准液使用，现用现配。

备注：实验中每管需要100μL，为减小实验误差，故配制大体积。

3、样本测定

在 1.5mL EP 管中依次加入下列试剂：

试剂（μL）	空白管	标准管	测定管
样本	-	-	100
试剂R1	-	100	-
蒸馏水	100	-	-
试剂R2	700	700	700
试剂R3	200	200	200

涡旋混匀，置于 80℃水浴锅中准确反应 10min（盖紧，以防止水分散失），冷却至室温后取 200μL至微量玻璃比色皿或 96 孔板中测定 480nm 处光吸收值，记为 A 空白管、A 标准管、A 测定管，并计算 ΔA 测定=A 测定管-A 空白管、ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。标准管和空白管只需测 1-2 次。

四、果糖含量计算

1、按样本蛋白浓度计算

果糖含量（mg/mg prot）=C标×ΔA测定÷ΔA标准×V样总÷（Cpr×V样总）

2、按样本质量计算

果糖含量（mg/g 质量）=C标×ΔA测定÷ΔA标准×V样总÷W

C标准管：标准管浓度；

V样总：加入提取液体积；

Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；

W：样本质量，g。

注意事项：

如果样本吸光值大于1.3，建议将样本用提取液稀释后进行测定。计算公式中注意乘以稀释倍数。

本试剂盒仅供科研使用!