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Cat. Number
HK21620-48S
Chemical Name
HK21620-48S 植物总酚测试盒(酶标板法)
Qty 1
100T/48S
References

植物酚类物质具有清除自由基,抗氧化抗衰老的作用,具有较高的营养价值和医疗保健作用而广泛应用于化妆品、食品、医药等领域。


测定原理:
在碱性条件下,酚类物质将钨钼酸还原,产生蓝色化合物,在760nm处有特征吸收峰,测760nm处的吸光值,即可得样本总酚含量。


需要的仪器,耗材:

1、可见分光光度计/酶标仪

2、微量玻璃比色皿/96孔板

3、天平

4、烘箱

5、粉碎仪/研钵

6、30-50目筛

7、超声清洗仪

8、60%乙醇

9、台式离心机

10、蒸馏水。


产品组成:

试剂名称规格保存条件
提取液液体×1 瓶常温
试剂R1液体×1 瓶2-8℃
试剂R2液体×1 瓶2-8℃
标准品粉剂×1 支 2-8℃


实验步骤:

一、样本处理(具体比例可以参考文献)

将样本烘干至恒重,粉碎,过30-50 目筛之后,称取约0.1g,加入2.5mL 提取液,用超声提取法进行提取,超声功率300W,温度60℃,提取30min。12000rpm,25℃,离心10min,取上清,用提取液定容至2.5mL,待测。

二、试剂准备

1、提取液:自备60%乙醇,常温保存。

2、标准品:5mg 没食子酸。临用前加入1mL 蒸馏水,50℃加热溶解,配制成5mg/mL 的标准溶液,2-8℃保存两周。

三、测定步骤

1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至760nm,分光光度计蒸馏水调零。

2. 标准液的稀释:将5mg/mL没食子酸标准溶液用蒸馏水稀释至0.1562、0.0781、0.0391、0.0195、0.0098、0.0049mg/mL,待测。

标准液稀释可参考下表:

序号稀释前浓度(mg/mL)标准液体积(μL)提取液体积(μL)稀释后浓度(mg/mL)
151258750.625
20.6252507500.15625
30.156252002000.078125
40.0781252002000.0391
50.03912002000.0191
60.01912002000.0098
70.00982002000.0049

4、样本测定:

1.5mL离心管中或96孔板依次入下列试剂:

试剂(μL)对照管测定管标准管空白管
样本待测液1010--
标准液--10-
蒸馏水---10
试剂R1-505050
                                                                         涡旋混匀,室温准确静置2min
试剂R250505050
蒸馏水14090
9090

涡旋混匀,室温准确静置10 min,于微量玻璃比色皿/96 孔板中测定760nm 处的吸光值,分别记为A 对照管、A 测定管、A 标准管、A 空白管。计算ΔA 测定=A 测定管-A 对照管,ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。每个测定管需设一个对照管。标准曲线和空白管只需测1-2 次。

四、总酚含量计算

1. 标准曲线绘制:根据标准管的浓度(y,mg/mL)和吸光度ΔA标准(x,ΔA标准),建立标准曲线。根据标

准曲线,将ΔA测定(x,ΔA测定)带入公式计算样本浓度(y,mg/mL)。

2. 植物总酚含量计算:

(1)按样本质量计算:总酚含量(mg/g 质量)=y×V提取÷W

(2)按样本蛋白浓度计算:总酚含量(mg/mg prot)=y×V提取÷(V提取×Cpr)

V提取:加入提取液体积;

Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;

W:样本质量,g。


注意事项:

1. 如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。注意同步修改计算公式。

2. 试剂一对皮肤有一定的刺激性,请操作时做好防护措施。


本试剂盒仅供科研使用!

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