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| Cat. Number | HK21618-96S |
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| Chemical Name | HK21618-96S 植物中脂氧合酶 (LOX)测试盒(酶标板法) |
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| Qty 1 |
100T/96S |
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| References | 植物中脂氧合酶LOX 广泛存在于植物组织中，特别是黄豆种子中。LOX 催化不饱和脂肪酸氧化反应，导致膜脂过氧化。在植物的生长发育、成熟衰老及逆境胁迫过程中具有重要作用。 测定原理： 植物中脂氧合酶LOX催化亚油酸氧化，氧化产物在234nm处有特征吸收峰；测定234nm吸光度增加速率，来计算LOX活性。 需自备的试剂和器材： 1、研钵/匀浆器 2、冰 3、台式离心机 4、紫外分光光度计/酶标仪 5、微量石英比色皿/96 孔UV 板 6、可调式移液枪 7、蒸馏水。 产品组成：
实验步骤： 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 称取约0.1g 样本，加提取液1mL，冰上充分研磨，16000g 4℃离心20min，取上清液置冰上待测。 二、试剂准备 1、提取液：临用前将粉剂1倒入提取液中，溶液为悬浊液，使用前需摇匀。 三、测定步骤 1. 分光光度计/酶标仪预热30 min 以上，调节波长到234nm，蒸馏水调零。 2. 试剂R1在25℃水浴中预热30min 以上。 3. 样本测定： 在微量石英比色皿/96 孔板中依次加入：
四、LOX 活性计算 a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下 1. 按蛋白浓度计算 活性单位定义：在1mL 体系下，25℃中每毫克蛋白每分钟催化吸光值变化0.001 个单位为一个酶活单位。 LOX (U/mg prot) = [(A4-A3)-(A2-A1)]÷0.001÷(Cpr×V 样)÷T×V 反总 2. 按样本质量计算 活性单位定义：在1mL 体系下，25℃中每克样本每分钟催化吸光值变化0.001 个单位为一个酶活单位。 LOX (U/g 质量) = [(A4-A3)-(A2-A1)]÷0.001÷(V 样÷V 样总×W)÷T×V 反总 Cpr：上清液蛋白浓度，mg/mL（需另外测定）； W：样本质量，g； V 样：加入反应体系中上清液体积； V 样总：上清液总体积； T：反应时间，1min； V 反总：反应总体系。 b.使用96 孔UV 板测定的计算公式如下 3. 按蛋白浓度计算 活性单位定义：在1mL 体系下，25℃中每毫克蛋白每分钟催化吸光值变化0.0006 个单位为一个酶活单位。 LOX (U/mg prot) = [(A4-A3)-(A2-A1)]÷0.0006÷(Cpr×V 样)÷T×V 反总 4. 按样本质量计算 活性单位定义：在1mL 体系下，25℃中每克样本每分钟催化吸光值变化0.0006 个单位为一个酶活单位。 LOX (U/g 质量) = [(A4-A3)-(A2-A1)]÷0.0006÷(V 样÷V 样总×W)÷T×V 反总 Cpr：上清液蛋白浓度，mg/mL（需另外测定）； W：样本质量，g； V 样：加入反应体系中上清液体积； V 样总：上清液总体积； T：反应时间，1min； V 反总：反应体系总体积。 注意事项： 1．样本处理等过程均需要在冰上进行，且须在当日完成酶活性测定。 2．正式实验前做1~2 个预实验，保证ΔA 的值在0.02~1.2（微量石英比色皿）/0.01~0.72（96 孔板）范围内；若反应后为明显的悬浊液，则需稀释后再测。 本试剂盒仅供科研使用! |
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