您的位置:首页>>分析化学>>试剂盒>>HK21614-48S 植物原花青素测试盒(酶标板法)
Cat. Number
HK21614-48S
Chemical Name
HK21614-48S 植物原花青素测试盒(酶标板法)
Qty 1
100T/48S
References

原花色素(Oligomeric Proantho Cyanidins,OPC)是一类黄烷醇单体及其聚合体的多酚化合物,广泛存在于植物的各种器官中,具有极强的抗氧化性和清除自由基的作用,广泛的应用于医药,食品,化妆品,保健品行业。 


检测原理:

在酸性条件下,植物原花青素A环上的间苯二酚和间苯三酚与香草醛发生缩合反应,产生有色化合物,在500nm 处有特征吸收峰,测定500nm光吸收值,可计算植物中原花青素的含量。


需要的仪器,耗材:

1、可见分光光度计/酶标仪

2、微量玻璃比色皿/96孔板

3、天平

4、台式离心机

5、粉碎仪

6、超声清洗仪

7、30-50目筛

8、蒸馏水。


产品组成:

试剂名称规格保存条件
提取液液体×1 瓶2-8℃
试剂R1液体×1 瓶2-8℃
试剂R2粉剂×1 瓶2-8℃
标准品粉剂×1支2-8℃


实验步骤:

注意:实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

将样本烘干至恒重,粉碎,过30-50 目筛之后,称取约0.1g,加入1mL 提取液,用超声提取法进行提取(功率300W,温度25℃,时间30min);12000rpm,25℃离心10min,取上清,用提取液定容至1mL,待测。

二、试剂准备

1.试剂R2:临用前加8 mL 提取液,充分溶解。配制好的试剂R2应尽快使用,2-8℃保存时间不超过一个月;

2.标准品:10 mg 原花青素。临用前加入1mL 提取液,充分溶解得到10 mg/mL 标准液,4℃保存两周;

3.工作液:临用前按照用量将试剂R1和试剂R2按照1:1 混合,现用现配。用多少配多少。

三、测定步骤

1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至500nm,分光光度计用蒸馏水调零。

2. 标准溶液制备:将10mg/mL标准液用提取液稀释为4、2.5、1.25、0.625、0.3125、0.15625mg/mL的标准溶液。

   标准液稀释可参考下表:

序号稀释前浓度(mg/mL)标准液体积(μL)提取液体积(μL)稀释后浓度(mg/mL)
1102003004
2101253752.5
32.55005001.25
41.255005000.625
50.6255005000.3125
60.31255005000.15625

备注:实验中每个标准管需40μL 标准溶液。

3. 样本测定

1.5mL离心管中或96孔板依次入下列试剂:

试剂(μL)对照管测定管标准管空白管
样本待测液4040--
标准液--40-
工作液-160160160
H2O160--40
涡旋混匀,置于30℃水浴中准确反应30min,取反应液于微量玻璃比色皿/96 孔板中检测500nm 处吸光值,计算ΔA 测定=A 测定管-A 对照管,ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。每个测定管需设一个对照管,标准曲线和空白管只需测1-2 次。


四、OPC 计算公式

1. 根据标准管的浓度(x,mg/mL)和吸光度ΔA标准(y,ΔA标准),建立标准曲线。根据标准曲线,将ΔA测定(y,ΔA测定)带入公式计算样本浓度(x,mg/mL)。

2. OPC的计算:

(1)按样本质量计算:OPC含量(mg/g 质量)=x×V提取÷W

(2)按样本蛋白浓度计算:OPC含量(mg/mg prot)=x×V提取÷(Cpr×V提取)

V提取:加入提取液体积;

Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;

W:样本质量,g。


注意事项:

1、如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定,注意同步修改计算公式。


本试剂盒仅供科研使用!


在线咨询 联系方式 二维码

服务热线

021-60498804

扫一扫,关注我们