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| Cat. Number | HK21610-96S |
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| Chemical Name | HK21610-96S 植物叶绿体中果糖-1,6-二磷酸醛缩酶(FBA)测试盒(酶标板法) |
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| Qty 1 |
100T/96S |
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| References | 果糖1,6-二磷酸醛缩酶（Fructose 1,6 bisphosphate aldolase，FBA）（EC4.1.2.13）是糖酵解、糖异生、磷酸戊糖途径及光合作用中参与calvin 循环的重要酶，催化果糖1,6-二磷酸可逆的裂解为磷酸二羟丙酮和3-磷酸甘油醛，广泛存在于动植物及微生物体内，在各种逆境胁迫下表现不同的响应。 测定原理： 植物组织中果糖1,6-二磷酸醛缩酶催化果糖1,6-二磷酸生成3-磷酸甘油醛和磷酸二羟丙酮，在磷酸丙糖异构酶和α-磷酸甘油脱氢酶作用下催化NADH 和磷酸二羟丙酮生成NAD和α-磷酸甘油，340nm 处吸光值的变化可反映果糖1,6-二磷酸醛缩酶活性的高低。 需自备的仪器和用品： 1、紫外分光光度计/酶标仪 2、天平 3、低温离心机 4、微量石英比色皿/96 孔UV 板 5、可调式移液枪 6、研钵/匀浆器、 漩涡震荡仪 7、超声破碎仪 8、冰。 产品组成：
实验步骤： 注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（具体比例可以参考文献） 叶绿体FBA 酶的分离： （1） 按照植物组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5-10 的比例（建议称取约0.1g 样本，加入1mL 提取液一），手工快速研磨或匀浆，之后于4℃，200g 离心5min； （2） 弃沉淀，取上清在4℃，8000g 离心10min（离心时缓慢加速和降速）； （3） 取沉淀加1mL 提取液R2，震荡溶解后超声破碎（冰浴，200W，破碎3s，间歇7s，总时间1min），然后4℃，8000g 离心10min，上清即为叶绿体中FBA 酶活性。 二、试剂准备 1、试剂R2：临用前加入2 mL 蒸馏水，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融； 2、试剂R3：临用前加入2 mL 蒸馏水充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融； 3、试剂R4：液体置于试剂瓶内EP 管中。临用前加入2 mL 蒸馏水充分溶解，用不完的试剂-分装后20℃保存，禁止反复冻融； 4、试剂R5：液体置于试剂瓶内EP 管中。临用前加入2 mL 蒸馏水充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。 三、测定步骤 1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。 2、样本测定： 在微量石英比色皿/96孔UV板中分别加入下列试剂：
注意：如果检测样本量大，可以将试剂R1、R2、R3、R4、R5按照5:1:1:1:1（V:V:V:V:V）的比例配成工作液待用（现配现用）。 四、FBA 酶活计算 A、按微量石英比色皿计算： 1、按蛋白浓度计算 酶活单位定义：每mg 组织蛋白每分钟消耗1nmol 的NADH 定义为一个酶活力单位。 FBA 酶活（U/mg prot）=ΔA÷（ε×d）×109×V 反总÷(V 样×Cpr) ÷T 2、按样本质量计算 酶活单位定义：每g 组织每分消耗1nmol 的NADH 定义为一个酶活力单位。 FBA 酶活（U/g 质量）=ΔA÷（ε×d）×109×V 反总÷（W ×V 样÷V 样总) ÷T 3、按照细胞或细菌数量计算 酶活单位定义：每104 个细胞或细菌每分钟消耗1nmol 的NADH 定义为一个酶活力单位。 FBA 酶活（U/104 cell）=ΔA÷（ε×d）×109×V 反总÷(V 样×细胞数量÷V 样总) ÷T 4、按液体体积计算 酶活单位定义：每mL 液体每分钟消耗1nmol 的NADH 定义为一个酶活力单位。 FBA 酶活（U/mL）=ΔA÷（ε×d）×109×V 反总÷V 样÷T V 反总：反应体系总体积； ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×103L/mol/cm； d：比色皿光径，1cm； V样：加入样本体积； V 样总：加入提取液体积； T：反应时间，5min； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL，蛋白浓度自行测定； W：样本质量，g； 109：单位换算系数，1mol=109nmol。 B、按96 孔UV 板计算： 将上述公式中的d-1cm改为d-0.6cm（96孔板光径）进行计算即可。 注意事项： 1、若ΔA 大于0.8 建议将样本用相应提取液进行适当的稀释再进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。 2、若是植物样本，建议在提取完成后2h 内检测完，如果样本量过大，建议分批提取、检测。 3、由于提取液1中含有一定浓度的蛋白（约0.5mg/mL），所以在测定样品蛋白浓度时需要减去提取液本身的蛋白含量。 本试剂盒仅供科研使用! |
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