HK21602-48S 植物脱氢酶(PDHA)测试盒(酶标板法)_上海惠诚生物生物试剂,标准品,仪器设备,耗材,一站式服务

受氢体2,3,5-氯化三苯基四氮唑（2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride，即TTC）在细胞呼吸过程中接受氢以后，其还原产物三苯基甲替（TriphenylFormazone，即TFF）呈现红色，在波长485nm处有最大吸收峰，采用分光光度法于485nm测定其吸光值，即得植物脱氢酶活性。

需自备的仪器和用品：

1、台式离心机

2、可见分光光度计/酶标仪

3、水浴锅

4、微量玻璃比色皿/96孔板（非聚苯乙烯/聚丙烯材质）

5、可调式移液枪

6、冰

7、研钵/匀浆器

8、蒸馏水

9、乙酸乙酯（不允许快递，请用户自备）。

产品组成：

试剂名称	规格	保存条件
试剂R1	粉剂×2 支	2-8℃
试剂R2	液体×2瓶	2-8℃
试剂R3	液体×1瓶（自备）	2-8℃

实验步骤：

注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

称取0.1g 的植物组织，用双蒸水清洗3-4 次，用滤纸吸干水分，备用。

二、试剂准备

1、试剂R1：使用前加少量水溶解，定容至50 mL，避光、4℃保存（尽量现配现用）；

2、试剂R3：自备乙酸乙酯。

三、测定步骤

1、可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至485nm，乙酸乙酯调零。

2、操作表：

取5mLEP管依次加入。

加入试剂(mL)	对照管	测定管
样本(g)	0.1	0.1
试剂R1	-	1
试剂R2	2	1
充分混匀，37℃，暗培养3h，取出后立即冰浴5min，去滤液，尽量用滤纸吸干样本，置于研钵/匀浆器中。
试剂R3	1	1
充分研磨（建议在通风橱操作）后全部移至于离心管中，用少量试剂三冲洗研钵，一起加入离心管，用试剂三定容至2mL，10000rpm/min，4℃，离心5min，取200μL 上清至微量玻璃比色皿或96 孔板中，测定485nm下的吸光值。计算ΔA=A 测定-A 对照。