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Cat. Number
HK21600-48S
Chemical Name
HK21600-48S 植物类黄酮测试盒(酶标板法)
Qty 1
100T/48S
References

类黄酮是一类多苯化合物,属于植物次生代谢物,对人体具有消炎,抗菌,降血脂,清除体内羟自由基,预防癌症等作用。


检测原理:

在碱性亚硝酸盐溶液中,类黄酮与铝离子形成在470nm处有特征吸收峰的红色络合物,测定样本提取液在470nm处的吸光值,即可计算样本类黄酮含量。


需自备的仪器和用品:

1、可见分光光度计/酶标仪

2、微量玻璃比色皿/96孔板

3、天平

4、烘箱

5、粉碎仪

6、30-50目筛

7、超声清洗仪

8、60%乙醇

9、台式离心机

10、研钵

11、蒸馏水

12、水浴锅/恒温培养箱。


产品组成:

试剂名称规格保存条件
提取液液体×1 瓶常温
试剂R1液体×1 瓶2-8℃
试剂R2液体×1 瓶2-8℃
试剂R3液体×1 瓶2-8℃
标准品粉剂×1 支2-8℃
标准品稀释液液体×1 瓶2-8℃


实验步骤:

注意:实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理(具体比例可以参考文献)

将样本烘干至恒重,粉碎,过30-50 目筛之后,称取约0.1g,加入1mL 提取液,用超声提取法进行提取,超声功率300W,温度60℃,提取30min。12000rpm,25℃,离心10min,取上清,用提取液定容至1mL,待测。

二、试剂准备

1、提取液:自备60%乙醇,常温保存;

2、标准品:10 mg 芦丁。临用前加入1 mL 标准品稀释液配制成10 mg/mL 标准液备用,2-8℃保存四周。

三、测定步骤

1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至470nm,分光光度计用蒸馏水调零。

2. 标准溶液的制备:将10mg/mL芦丁标准溶液用标准品稀释液稀释至2.5、1.25、0.625、0.3125、0.15625、0.078、0.039mg/mL备用,具体稀释可参考下表。

序号稀释前浓度(mg/mL)标准液体积(μL)提取液体积(μL)稀释后浓度(mg/mL)
1102507502.5
22.52002001.25
31.252002000.625
40.6252002000.3125
50.31252002000.15625
60.156252002000.078
70.0782002000.039
80.0392002000.02

3. 操作表

试剂名称(uL)对照管测定管标准管空白管
样本待测液6060--
标准溶液--60-
蒸馏水---60
试剂R115151515
                                                                                          涡旋混匀,室温静置5min
试剂R2-151515
                                                                                            涡旋混匀,室温静置5min
试剂R3120120120120
60%乙醇(μL)105909090

涡旋混匀,置于37℃水浴锅/恒温培养箱中准确反应45 min,10000g,室温离心10min,取上清200μL 于微量玻璃比色皿/96 孔板中,测定A470。计算ΔA 测定=A 测定-A 对照,ΔA 标准=A 标准-A 空白。每个测定管需设一个对照管,标准曲线和空白管只需测1-2 次。


三、类黄酮含量计算

1. 根据标准管的浓度(x,mg/mL)和吸光度ΔA标准(y,ΔA标准),建立标准曲线。根据标准曲线,将ΔA测定(y,ΔA测定)带入公式计算样本浓度(x,mg/mL)。

2. 按样本质量计算

类黄酮含量(mg/g 质量)=x×V提取÷W=x÷W。

3. 按样本蛋白浓度计算

类黄酮含量(mg/mg prot)=x×V提取÷(Cpr×V提取) 

V提取:加入提取液体积;

W:样本质量,g;

Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL。



注意事项:

1. 如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。注意同步修改计算公式。

2. 显色完成后立即测定,2小时后吸光值会下降。



本试剂盒仅供科研使用!


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