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Cat. Number

HK21594-96S

Chemical Name

HK21594-96S 植物氨态氮测试盒(酶标板法)

Qty 1

100T/96S

References

氮素是构成生物体的一种必需元素，自然界中的氮素循环包括许多转化作用。空气中的氮气被固氮微生物及植物与微生物的共生体固定成氨态氮，经过硝化微生物的作用转化成硝态氮，后者被植物或微生物同化成有机氮化物，植物组织氨氮含量可反映植物受胁迫的程度。

测定原理：

氨基酸的α-氨基可与水合茚三酮反应，产生蓝紫色化合物，在570nm有特征吸收峰；通过测定570nm吸光度，来计算氨基酸含量。

需自备的仪器和用品：

1、可见分光光度计/酶标仪

2、台式离心机

3、水浴锅

4、微量玻璃比色皿/96孔板

5、可调式移液枪

6、研钵/匀浆器

7、无水乙醇、冰和蒸馏水。

产品组成：

试剂名称	规格	保存条件
提取液	液体×1瓶	2-8℃
试剂R1	粉剂×1瓶	2-8℃
试剂R2	粉剂×2瓶	2-8℃
试剂R3	液体×1瓶	2-8℃
标准品	粉剂×1支	2-8℃

实验步骤：

注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理（具体比例可以参考文献）

按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g，加入1mL 提取液）加入提取液，室温匀浆后于25℃，12000g 离心10min，取上清待测。

二、试剂准备

1、试剂R1：临用前将试剂三倒入使其充分溶解备用。该试剂溶解后10天内有效。

2、试剂R2：临用前加1mL 蒸馏水充分溶解。

3、标准品：10 mg 半胱氨酸，临用前加入1.157 mL 提取液，得到1000 μg/mL 氮标准液。

三、测定步骤

1. 分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至570nm，分光光度计蒸馏水调零。

2. 将1000μg/mL氮标准液用提取液分别稀释为400、300、200、100、50、25 μg/mL。

3. 操作表：

试剂名称（μL）	测定管	标准管	空白管
样本	15	-	-
标准品	-	15	-
提取液	-	-	15
试剂R1	150	150	150
无水乙醇	150	150	150
试剂R2	15	15	15

充分混匀后盖紧瓶盖封口膜封口（防止水分散失），置于沸水浴中保温10min，冷却后反复颠倒EP 管数次，将测定管8000rpm 离心5min 后取上清，吸取200μL 于微量玻璃比色皿或者96 孔板中，于570nm 测定吸光值。显色后务必在30min 内测完。计算ΔA=A 测定管-A 空白管，ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。

四、植物氨态氮含量计算

1. 标准曲线的绘制：

以各个氮标准液为横坐标，其对应的ΔA标准为纵坐标，建立标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将ΔA带入方程中，得到x (μg/mL)。

2. NH3-N含量的计算：

（1）按样本质量计算：NH3-N含量（μg/g 质量）=x×V提取÷W

（2）按蛋白浓度计算：NH3-N含量（μg/mg prot）=x×V提取÷（Cpr×V提取）

W：样本质量，g；

Cpr：蛋白浓度，mg/mL；

V提取：样本提取液总体积。

注意事项：

为保证实验结果的准确性，需先取1-2个样做预实验，如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。

本试剂盒仅供科研使用!