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| Cat. Number | HK21592-48S |
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| Chemical Name | HK21592-48S 植酸酶测试盒(酶标板法) |
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| Qty 1 |
100T/48S |
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| References | 植酸酶（phytase）是催化植酸及其盐类水解为肌醇与磷酸（盐）的一类酶的总称，属磷酸单酯水解酶，它能将食品和饲料中植酸及其盐转化为可供有机体利用的有效磷，降低粪便中的磷含量，减轻对环境的污染，改善营养成分的吸收和利用，因此具有极其广泛的研究和应用价值。 测定原理： 在一定的环境条件下，植酸酶可以分解植酸钠(肌醇六磷酸+二钠)产生无机磷和肌醇衍生物，在酸性条件下，无机磷和钼酸铵显色剂发生反应，产生蓝色的钼蓝物质，其在 700nm 有特征吸收峰，通过测定无机磷的含量，可计算出植酸酶的活性。 需要的仪器，耗材: 1、可见分光光度计/酶标仪 2、低温离心机 3、水浴锅/恒温培养箱 4、可调式移液器 5、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪 6、浓硫酸 7、微量玻璃比色皿/96 孔板 8、冰和蒸馏水。 产品组成：
实验步骤: 注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理(具体比例可以参考文献) 组织：按照样本质量(g)：提取液体积(mL)为1.5~10的比例(建议称取约0.1组织，加入1mL提取液)加入提取液，冰浴匀浆；4000g4℃离心 10min(若仍然浑浊，可延长离心时间)，取上清置冰上待测。 2. 细菌或细胞样本：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照细菌或细胞数量(104个)：提取液体积(mL)为500~10001的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL摄取液)加入提取液，超声波破碎细菌或细胞(冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 7s，总时间3min)，4000g 4℃离心10min，取上清置冰上待测。 3. 培养液或其他液体：直接检测。若溶液浑浊则离心后取上清进行测定。 二、试剂准备 1. 试剂R1：临用前加入到缓冲液中(可吸取缓冲液到试剂一瓶中反复冲洗)，充分震荡溶解，用不完的试剂 2-8℃可保存4周。 2. 试剂R2：临用前加入3.15mL蒸馏水充分溶解，再将枪头伸入液面下缓慢加入 0.85mL浓硫酸，2-8℃可保存4周。 3. 试剂R3：临用前加入20mL蒸馏水充分溶解，2-8℃可保存4周。。 4 工作液： 临目前根据测定数量将试剂R1：试剂R3 1mL:5mL(约40T)的比例混夕，配制后2-8可保存3天。 5. 标准品：5umol/mL 无机磷标准液。 三、测定步骤 1、可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至700nm，可见分光光度计用蒸馏水调零。 2、标准溶液的稀释：将5umol/mL无机磷标准液用蒸馏水稀释至5、3、1、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125umol/mL备用。 3、标准溶液稀释可参考下表：
备注:实验中每个标准管需50uL标准溶液。 4、在EP 管中按下表步骤加样:
室温静置10min，8000g，室温离心10min，吸取200uL上清，于700nm处测定吸光值，分别记为A测定、A对照、A标准、A空白。分别计算AA测定-A对照A标准一A标准-A空白(标准曲线和空白管只需做1-2次，每个测定管需设置一个对照管)。 四、植酸酶活性的计算 1.标准曲线的绘制 根据标准管的浓度(x，umol/mL)和吸光度ΔA标准(y，A标准)，建立标准曲线。根据标准曲线，将A(y，A)代入公式计算样本浓度(x，umol/mL)。 2.植酸酶活性计算 (1)按样本蛋白质浓度计算 单位定义：在37℃，pH5.5环境下，每mg组织蛋白每分钟在反应体系释放1umol无机磷为1个酶活力单位。 植酸酶活性(U/mgprot)=xxV样总÷(CprxV样总)÷T (2)按样本质量计算 单位定义：在37℃，pH5.5环境下，每g组织每分钟在反应体系释放1umol无机磷为1个酶活力单位。 植酸酶活性(U/g质量)=xxV样总÷W÷T=x÷W÷30:(3) (3)按细菌/细胞数量计算 单位定义：在37℃，pH5.5环境下，每104个细胞每分钟在反应体系释放1umol无机磷为1个酶活力单位。 植酸酶活性(U/104cell)=xxV样总÷细胞数量÷T (4)按照液体样本体积计算 单位定义：在37℃，pH5.5环境下，每mL样本每分钟在反应体系释放1umol无机磷为1个酶活力单位。 植酸酶活性(U/mL)=xxV样÷V样÷T V样：加入样本体积; V样总：提取液体积； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL; W：样本质量 g; T：反应时间，30min; 细胞数量：以万计。 注意事项: 1.为防止沸水浴10min过程中水分散失，建议使用螺旋管或用封口膜给EP管缠口。 2.如果测定吸光值过低或接近空白，适当延长反应时间或加大样本量后，重新测定。如果A测定大于1.5或者ΔA超过检测范围，建议将样本用蒸馏水进行适当稀释后进行测定。注意同步修改计算公式。 3. 结果于40min内测定完毕。 本试剂盒仅供科研使用! |
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下一个：植物氨态氮测试盒(可见分光光度法)上一个：植酸酶测试盒(可见分光光度法) |
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