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Cat. Number

HK21591-24S

Chemical Name

HK21591-24S 植酸酶测试盒(可见分光光度法)

Qty 1

50T/24S

References

植酸酶（phytase）是催化植酸及其盐类水解为肌醇与磷酸（盐）的一类酶的总称，属磷酸单酯水解酶，它能将食品和饲料中植酸及其盐转化为可供有机体利用的有效磷，降低粪便中的磷含量，减轻对环境的污染，改善营养成分的吸收和利用，因此具有极其广泛的研究和应用价值。

测定原理：

在一定的环境条件下，植酸酶可以分解植酸钠(肌醇六磷酸+二钠)产生无机磷和肌醇衍生物，在酸性条件下，无机磷和钼酸铵显色剂发生反应，产生蓝色的钼蓝物质，其在 700nm 有特征吸收峰，通过测定无机磷的含量，可计算出植酸酶的活性。

需要的仪器，耗材:

1、可见分光光度计/酶标仪

2、低温离心机

3、水浴锅/恒温培养箱

4、可调式移液器

5、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪

6、浓硫酸

7、微量玻璃比色皿/96 孔板

8、冰和蒸馏水。

产品组成：

试剂名称	规格	保存条件
提取液	液体x1瓶	2-8℃
缓冲液	液体x1瓶	2-8℃
试剂R1	粉剂x1瓶	2-8℃
试剂R2	液体x1瓶	2-8℃
试剂R3	液体x1瓶	2-8℃
标准品	液体x1支	2-8℃

实验步骤:

注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理(具体比例可以参考文献)

组织：按照样本质量(g)：提取液体积(mL)为1.5~10的比例(建议称取约0.1组织，加入1mL提取液)加入提取液，冰浴匀浆；4000g4℃离心 10min(若仍然浑浊，可延长离心时间)，取上清置冰上待测。

2. 细菌或细胞样本：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照细菌或细胞数量(104个)：提取液体积(mL)为500~10001的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL摄取液)加入提取液，超声波破碎细菌或细胞(冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 7s，总时间3min)，4000g 4℃离心10min，取上清置冰上待测。

3. 培养液或其他液体：直接检测。若溶液浑浊则离心后取上清进行测定。

二、试剂准备

1. 试剂R1：临用前加入到缓冲液中(可吸取缓冲液到试剂一瓶中反复冲洗)，充分震荡溶解，用不完的试剂 2-8℃可保存4周。

2. 试剂R2：临用前加入6.3mL蒸馏水充分溶解，再将枪头伸入液面下缓慢加入1.7mL浓硫酸，2-8℃可保存4周。

3. 试剂R3：临用前加入40mL蒸馏水充分溶解，2-8℃可保存4周。。

4 工作液：临目前根据测定数量将试剂R1：试剂R3 1mL:5mL(约40T)的比例混夕，配制后2-8可保存3天。

5. 标准品：5umol/mL 无机磷标准液。

三、测定步骤

1、可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至700nm，可见分光光度计用蒸馏水调零。

2、标准溶液的稀释：将5umol/mL无机磷标准液用蒸馏水稀释至5、3、1、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125umol/mL备用。

3、标准溶液稀释可参考下表：

序号	稀释前浓度(mg/mL)	标准液体积(uL)	蒸馏水体积(uL)	稀释后浓度(mg/mL)
1	5	400	600	2
2	2	500	500	1
3	1	500	500	0.5
4	0.5	500	500	0.25
5	0.25	500	500	0.125
6	0.125	500	500	0.0625
7	0.0625	500	500	0.03125
8	0.03125	500	500	0.0156

备注:实验中每个标准管需50uL标准溶液。

4、在EP 管中按下表步骤加样:

试剂名称(uL)	测定管	对照管	标准管	空白管
样本	50	50	-	-
标准溶液	-	-	50	-
37℃水浴5min			-	-
试剂R1	120	-	-	-
37℃水浴30min，沸水浴10min
试剂R1	-	120	-	-
蒸馏水	-	-	120	170
工作液	150	150	150	150