服务热线
021-60498804
| Cat. Number | HK21587-48S |
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Chemical Name | HK21587-48S 脂肪酶(LPS)测试盒(可见分光光度法) |
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Qty 1 |
50T/48S |
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| References | 脂肪酶LPS又称甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和单酯）。LPS广泛的存在于各种生物中。血清中LPS的异常增高常见于胰腺炎和胰腺癌。 测定原理： LPS催化油酯水解成脂肪酸，利用铜皂法测定脂肪酸生成速率，即可计算LPS活性。 需自备的仪器和用品： 研钵/匀浆器、台式离心机、震荡混匀器、可见分光光度计、玻璃比色皿、可调式移液枪、甲苯、无水乙醇、冰和蒸馏水。 产品组成：
实验步骤： 注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 组织样本：称取约0.1g 样本，加试剂R1 1.0mL 充分研磨，于4℃，15000rpm 离心30min，取上清液待测。 血清样本：直接检测。 二、试剂准备 标准品：临用前加入1.435 mL 无水乙醇配成125 μmol/mL 的油酸标准溶液，充分溶解。用前注意解冻溶解。 三、测定步骤 1、可见分光光度计预热30min以上，调节波长至710nm，甲苯调零。 2、试剂R1和试剂R2置于37℃水浴预热30min以上。 3、标准溶液的稀释：将125μmol/mL的油酸标准溶液用乙醇稀释为125、62.5、31.25、15.625、7.8125、3.9μmol/mL的标准溶液待测。 4、操作表：
反复震荡混匀；室温4000rpm 离心10 min，小心吸取上层溶液800uL，加入1mL玻璃比色皿中，于710nm处测定吸光值。记为A 空白管、A 测定管、A 标准管，计算ΔA 测定=A 测定管-A 空白管，ΔA 标准=A 标准管-A空白管。 四、LPS活性计算 1、标准曲线的绘制：以油酸标准溶液浓度为横坐标，ΔA标准为纵坐标，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b。将ΔA测定带入方程，得到x（μmol/mL）。 2、酶活计算： （1）按蛋白浓度计算 活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟水解橄榄油生成1μmol脂肪酸为一个酶活单位。 LPS (U/mg prot) =x×V样÷（Cpr×V样) ÷T （2）按样本质量计算 活性单位定义：37℃中每克组织每分钟水解橄榄油生成1μmol脂肪酸为一个酶活单位。 LPS (U/g 质量) =x×V样÷（W×V样÷V提) ÷T （3）按血清计算 活性单位定义：37℃中每mL血清每分钟水解橄榄油生成1μmol脂肪酸为一个酶活单位。 LPS (U/mL 血清) =x÷T V样：加入反应体系中上清液体积； Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL，需要另外测定； T：催化反应时间，10min； W：样本质量，g； V提：提取液体积，1mL。 注意事项： 1、甲苯有毒，实验过程中需佩戴手套和口罩。 2、实验过程中须远离火源。 3、当吸光度大于1时，建议将样本稀释后测量。 4、如果用酶标板进行试验，建议选用非聚苯乙烯材质的96孔板。 本试剂盒仅供科研使用! |
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Copyright © 2022 上海惠诚生物科技有限公司
沪ICP备2021037845号-6
