服务热线
021-60498804
| Cat. Number | HK21584-48S |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Chemical Name | HK21584-48S 蔗糖酶测试盒(酶标板法) |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Qty 1 |
100T/48S |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| References | 蔗糖酶（EC 3.2.1.26）是碳水化合物消化吸收的关键酶之一，能够水解蔗糖变成相应的单糖而被机体吸收。
需要的仪器，耗材: 1、可见分光光度计/酶标仪 2、台式离心机 3、可调式移液器 4、微量石英比色皿/96孔板 5、研钵、冰和蒸馏水。 产品组成：
实验步骤： 一、样品准备 按照组织质量(g)：提取液体积(ml)为 1：5～10的比例(建议称取约 0.1g组织，加入 1ml提取液)，进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。 二、试剂准备 试剂R2：用时加入 1ml蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂 4℃保存。 标准品：用时加入1 mL 蒸馏水充分溶解，制备10 mg/mL 葡萄糖标准溶液待用；用不完的试剂4℃保存一周。 三、测定 1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至 520nm，蒸馏水调零。 2、标准品的制备 将标准品用蒸馏水按梯度稀释。标准液稀释可参考下表：
3、样本测定 在 EP管中依次加入下列试剂：
混匀，取200μL 至微量玻璃比色皿或96 孔板中测定各管540nm 吸光值，ΔA=A 测定管-A 对照管。（每个测定管需设一个对照管） 注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 四、蔗糖酶活力计算 1. 标准曲线的建立： 以标准品的浓度为x 轴，540nm 下的吸光度(ΔA 标准)为y 轴，绘制标准曲线。根据标准曲线，将ΔA（y）带入公式中计算出x 值（mg/mL）。 2. 按照蛋白浓度计算： 单位定义：每mg 组织蛋白每分钟催化水解1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。 蔗糖酶活力(U/mg prot)=(1000×x×V1）÷(V1×Cpr)÷T 3. 按照样本质量计算： 单位定义：每g 组织每分钟催化水解1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。 蔗糖酶活力(U/g 质量)=(1000×x×V1）÷(W÷V2×V1)÷T 1000：1mg/mL=1000μg/mL； V1：加入反应体系中样本体积； V2：加入提取液体积； T：反应时间，10min； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； W：样本质量，g。 注意事项： 当A 大于0.9 时，建议将样本用提取液稀释后进行测定。 本试剂盒仅供科研使用! |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Copyright © 2022 上海惠诚生物科技有限公司
沪ICP备2021037845号-6
