服务热线
021-60498804
产品中心
/ Products Classification 点击展开+Cat. Number | HK21584-48S |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Chemical Name | HK21584-48S 蔗糖酶测试盒(酶标板法) |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Qty 1 |
100T/48S |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
References | 蔗糖酶(EC 3.2.1.26)是碳水化合物消化吸收的关键酶之一,能够水解蔗糖变成相应的单糖而被机体吸收。
需要的仪器,耗材: 1、可见分光光度计/酶标仪 2、台式离心机 3、可调式移液器 4、微量石英比色皿/96孔板 5、研钵、冰和蒸馏水。 产品组成:
实验步骤: 一、样品准备 按照组织质量(g):提取液体积(ml)为 1:5~10的比例(建议称取约 0.1g组织,加入 1ml提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。 二、试剂准备 试剂R2:用时加入 1ml蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂 4℃保存。 标准品:用时加入1 mL 蒸馏水充分溶解,制备10 mg/mL 葡萄糖标准溶液待用;用不完的试剂4℃保存一周。 三、测定 1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至 520nm,蒸馏水调零。 2、标准品的制备 将标准品用蒸馏水按梯度稀释。标准液稀释可参考下表:
3、样本测定 在 EP管中依次加入下列试剂:
混匀,取200μL 至微量玻璃比色皿或96 孔板中测定各管540nm 吸光值,ΔA=A 测定管-A 对照管。(每个测定管需设一个对照管) 注意:实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 四、蔗糖酶活力计算 1. 标准曲线的建立: 以标准品的浓度为x 轴,540nm 下的吸光度(ΔA 标准)为y 轴,绘制标准曲线。根据标准曲线,将ΔA(y)带入公式中计算出x 值(mg/mL)。 2. 按照蛋白浓度计算: 单位定义:每mg 组织蛋白每分钟催化水解1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。 蔗糖酶活力(U/mg prot)=(1000×x×V1)÷(V1×Cpr)÷T 3. 按照样本质量计算: 单位定义:每g 组织每分钟催化水解1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。 蔗糖酶活力(U/g 质量)=(1000×x×V1)÷(W÷V2×V1)÷T 1000:1mg/mL=1000μg/mL; V1:加入反应体系中样本体积; V2:加入提取液体积; T:反应时间,10min; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL; W:样本质量,g。 注意事项: 当A 大于0.9 时,建议将样本用提取液稀释后进行测定。 本试剂盒仅供科研使用! |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||