服务热线
021-60498804
| Cat. Number | HK21581-24S |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Chemical Name | HK21581-24S 土壤中性转化酶（S-NI）活性检测试剂盒(可见分光光度法) |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Qty 1 |
50T/24S |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| References | 土壤中性转化酶S-NI在中性条件下催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖，是土壤微生物蔗糖代谢关键酶之一。 测定原理： 土壤中性转化酶S-NI催化蔗糖降解产生还原糖，进一步与3,5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，在540nm有特征光吸收，在一定范围内540nm光吸收增加速率与NI活性成正比。 需要的仪器，耗材: 1、可见分光光度计 2、台式离心机 3、可调式移液器 4、微量玻璃比色皿 5、研钵、冰和蒸馏水 6、30-50目筛 产品组成：
实验步骤： 注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30~50 目筛。 二、试剂准备 1、试剂R2：临用前加入试剂R1充分溶解备用；用不完的试剂 2-8℃保存2周； 2、标准品：10mg 葡萄糖，临用前加入 1mL 蒸馏水溶解，制备 10mg/mL 葡萄糖标准液备用，2-8℃保存两周。 三、测定步骤 1、分光光度计预热30min 以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。 2、标准品的制备：将标准液用蒸馏水稀释成0.5、0.3、0.2、0.1、0.08、0.06、0.04 mg/mL 葡萄糖标准液备用。 标准液稀释表如下：
备注：试验中每个标准管需标准品800μL。 3、样本测定：
混匀，煮沸10min 左右（盖紧，以防止水分流失），流水冷却后充分混匀，540nm 处记录各管吸光值A，ΔA测定=A测定-A 对照，ΔA标准=A标准-A 对照。每个测定管需设一个对照管。标准曲线和空白管只需测1-2 次。 四、S-AI 活性计算 1、标准曲线的建立： 以各浓度下吸光值减空白管（浓度为0 mg/mL）的吸光度ΔA标准为 y 轴，葡萄糖浓度为 x 轴绘制标准曲线。根据标准曲线，将ΔA测定带入方程得到x（mg/mL）。 2、S-AI 活性计算 单位定义：37℃每 g 土壤每天产生1mg还原糖定义为一个酶活性单位。 S-AI（U/g 土样）=x×V÷W÷T V：加入的标准液体积； W：样本质量，g； T：反应时间：1/24d。 注意事项： 1、如果加入试剂三，煮沸10min 后有混浊物出现，建议离心除去沉淀（10000rpm，2min），取上清测定吸光度； 2、如果吸光值大于1，可以将上清液再进行稀释；若吸光值较小，可以减少上清液稀释倍数。两种操作均要注意改变公式中的稀释倍数。 本试剂盒仅供科研使用! |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Copyright © 2022 上海惠诚生物科技有限公司
沪ICP备2021037845号-6
