HK21580-96S 蔗糖磷酸化酶(SP)测试盒(酶标板法)_上海惠诚生物生物试剂,标准品,仪器设备,耗材,一站式服务

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Cat. Number

HK21580-96S

Chemical Name

HK21580-96S 蔗糖磷酸化酶(SP)测试盒(酶标板法)

Qty 1

100T/96S

References

蔗糖磷酸化酶（Sucrose Phosphorylase, SP）(EC2.4.1.7)主要存在于微生物和植物中，属于糖基水解酶13 家族，是一种催化转移葡萄糖苷键的酶，能够催化蔗糖和无机磷酸盐合成1-磷酸-葡萄糖。该酶主要以蔗糖、1-磷酸葡萄糖为供体，多类物质如多羟基的糖和糖醇、酚羟基、羧基等为受体，催化合成各种糖苷。

测定原理：
蔗糖磷酸化酶SP能够以磷酸为受体，催化蔗糖产生1-磷酸葡萄糖，在葡萄糖磷酸变位酶催化下变位为6-磷酸葡萄糖，在6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用下还原NADP+生成NADPH，导致340nm光吸收值增加。测定340nm吸光度增加速率，即可计算SP活性。

需要的仪器，耗材:

1、可见分光光度计/酶标仪

2、台式离心机

3、可调式移液器

4、微量石英比色皿/96孔板

5、研钵、冰和蒸馏水。

产品组成：

试剂名称	规格	保存条件
提取液	液体×1 瓶	2-8℃
试剂R1	液体×1 瓶	2-8℃
试剂R2	粉剂×1 瓶	2-8℃
试剂R3	液体×1 支	2-8℃
试剂R4	粉剂×2 支	-20℃
试剂R5	粉剂×1 瓶	-20℃
试剂R6	粉剂×2 支	-20℃
试剂R7	粉剂×2 支	-20℃

实验步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、组织：按照组织质量（g）︰提取液体积(mL)为1︰5-10 的比例（建议称取约0.1 g 组织，加入1 mL 提取液）

进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃，离心10min ，取上清置于冰上待测。

2、细胞或细菌：先收集细胞或细菌到离心管内，离心后弃上清；按照细胞或细菌数量（104 个）：提取液体

积（mL）为500-1000︰1 的比例（建议500 万个细胞或细菌加入1 mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞或细菌

（功率200 W，超声3 秒，间隔7 秒，总时间3 min）；然后10000 g，4℃，离心10 min ，取上清置于冰上待测。

3、液体：直接检测。若液体浑浊可离心后取上清测定。

二、试剂准备

1、试剂R2：临用前加入6 mL 蒸馏水，充分混匀。4℃可以保存4 周。

2、试剂R4：临用前取1 支加入0.6 mL 蒸馏水，充分混匀。分装后-20℃保存，避免反复冻融，可以保存2 周；

3、试剂R5：粉剂置于瓶内玻璃管中。临用前加入10 mL 蒸馏水，充分混匀。-20℃分装保存，避免反复冻融，可以保存4 周；

4、试剂R6：临用前取1 支加入1 mL 蒸馏水，充分混匀（可做100T，为保证试剂盒使用时间，故多给一支）；可分装后-20℃保存，避免反复冻融，-20℃可以保存2 周；临用前按试剂R6：蒸馏水=1:1 的比例稀释试剂R6，现用现配；

5、试剂R7：临用前取1 支加入0.7 mL 蒸馏水，充分混匀；可分装后-20℃保存，避免反复冻融，-20℃可以保存2 周；临用前按试剂R7：蒸馏水=1:1 的比例稀释试剂R7，现用现配。

三、测定步骤

1、紫外分光光度计/酶标仪预热30 min 以上，调节波长至340 nm，分光光度计蒸馏水调零。

2、试剂R1 37℃预热10min。

3、操作表：

试剂名称（μL）	空白管	测定管
试剂R1	85	65
试剂R2	50	50
试剂R3	5	5
试剂R4	10	10
试剂R5	10	10
试剂R6	20	20
试剂R7	20	20
混匀，37℃水浴预热5min
样本（μL）	-	20
迅速吹打混匀，记录测定管第15s 的吸光值A1 测定（A1 空白），迅速置于37℃水浴或培养箱2min（酶标仪有控温功能可将温度调至37℃），拿出迅速擦干测定2min15s 时的吸光值A2 测定（A2 空白），计算ΔA =（A2测定-A1 测定）-（A2 空白-A1 空白）。空白管只需测定1-2 次，如果样本数量过多也可以将试剂一到试剂七按上述比例混匀后进行测定。