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Cat. Number
HK21576-48S
Chemical Name
HK21576-48S 蔗糖合成酶(SS)测试盒(酶标板法)
Qty 1
100T/48S
References

蔗糖是源(叶片等)光合产物向“库”器官运输的主要形态。蔗糖合成酶SS(EC 2.4.1.13)催化植物体内游离果糖和葡萄糖合成蔗糖。

测定原理:
SS催化游离果糖与葡萄糖供体UDPG反应生成蔗糖,蔗糖与间苯二酚反应可呈现颜色变化,在480nm下有特征吸收峰,酶活力大小与颜色的深浅成正比。



需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、离心机、移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰。


产品组成:

试剂名称规格保存条件
提取液液体×1 瓶2-8℃
试剂R1液体×1 瓶-20℃
试剂R2粉剂×1 支2-8℃
试剂R3液体×1 瓶2-8℃
试剂R4液体×1 瓶2-8℃
试剂R5液体×1 瓶2-8℃


实验步骤:

注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。 

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

二、试剂准备

试剂R2:临用前加1 mL水,配制成10 mg/mL蔗糖溶液,再将其用蒸馏水稀释为500μg/mL备用。

三、测定步骤

1、分光光度计或酶标仪预热30min 以上,调节波长至480nm,蒸馏水调零。

2、样本测定

在1.5mL EP管中依次加入下列试剂:


试剂名称(uL)测定管对照管标准管空白管
样本1010--
蒸馏水-454555
试剂R145---
试剂R2--10-
                                                                                混匀,25℃准确水浴10min
试剂R315151515
                                                   沸水浴中煮沸10min左右(盖紧,以防止水分散失),冷却                                                                 
试剂R4210210210210
试剂R560606060

混匀,80℃水浴保温20min,冷却后,12000rpm常温离心10min。吸取200μL上清液于微量玻璃比色皿或者96孔板中,在480nm下测定各管吸光值(标准管和空白管只做1-2管,每个测定管需要设定一个对照管)。计算ΔA测=A测定管-A对照管,ΔA标=A标准管-A空白管。

四、SS活力单位的计算

1. 按照蛋白浓度计算

单位定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化产生1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。

SS活性(U/mg prot)=(C标准管×V1×ΔA测÷ΔA标)÷(V1×Cpr)÷T

2. 按照样本质量计算

单位定义:每 g 组织每分钟催化产生1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。

SS活性(U/g 质量)=(C标准管×V1×ΔA测÷ΔA标)÷(W×V1÷V2)÷T

C标准管:标准管浓度;

V1:加入反应体系中样本体积;

V2:加入提取液体积;

Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;

W:样本鲜重,g;

T:反应时间,10min。


注意事项:

尽量在30min内完成测定。


本试剂盒仅供科研使用!

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