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Cat. Number

HK21572-24S

Chemical Name

HK21572-24S 游离脂肪酸含量测试盒(可见分光光度法)

Qty 1

50T/24S

References

游离脂肪酸FFA既是脂肪水解的产物，又是脂肪合成的底物。血清中FFA的浓度与脂类代谢、糖代谢、内分泌功能有关。

测定原理：

FFA与铜离子结合形成脂肪酸铜盐，并溶于氯仿；利用铜试剂法测定铜离子含量，即可推算出游离脂肪酸含量。

需自备的仪器和用品：

研钵/匀浆器、冰、台式离心机、可调式移液枪、可见分光光度计、微量玻璃比色皿/96 孔板、一个50mL玻璃瓶、一个10mL 玻璃瓶、正庚烷、无水甲醇、氯仿（三氯甲烷）、无水乙醇和蒸馏水。

产品组成：

实验步骤：

注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、血清中FFA 测定：将所取血液，室温静置1h 后，于4 ℃ 离心机3500 rpm 离心15min，取上层血清置于4℃冰箱保存，待测。

2、组织中FFA 含量测定：组织用生理盐水冲洗干净后，用吸水纸吸取表面水分，称取约0.1g，加入1 mL 提取液，匀浆后，8000rpm，4℃离心10min，取上清液，置冰上待测。

二、试剂准备

1、试剂R1：实验前一天，取一个玻璃瓶，按照正庚烷：无水甲醇：氯仿=24:1:25 的比例配置（自备），盖紧后混匀；

2、试剂R3：临用前每瓶加入32mL 无水乙醇充分溶解，4℃可保存一周；

3、标准品：临用前把试剂转移到10 mL 玻璃瓶中，加入7.8 mL 氯仿充分溶解，即为5μmol/mL 的棕榈酸标准溶液，4℃保存。

三、操作步骤

1. 分光光度计预热30 min 以上，调节波长到550 nm，无水乙醇调零。

2. 试剂R2在37℃水浴中预热30 min 以上。

3. 标准品的稀释：将标准品用氯仿稀释成0.8、0.6、0.4、0.2、0.1、0.05、0.025μmol/mL。

4. 按下表在1.5mL 离心管中加入相应试剂

试剂名称(uL)	对照管	测定管	空白管	标准管
蒸馏水	50	-	-	-
样本	-	50	-	-
氯仿	-	-	50	-
标准品	-	-	-	50
试剂R1	500	500	500	500
试剂R2	200	200	200	200
充分振荡10min后，3000rpm，离心10min
上层溶液	200	200	200	200
试剂R3	800	800	800	800
充分振荡2min 后，静置15min，在550 nm 下测吸光值，分别记为A 对照管、A 测定管、A 空白管、A 标准管。（对照管和空白管各只做1-2 管）