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| Cat. Number | HK21570-96S |
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| Chemical Name | HK21570-96S 游离胆固醇(FC)含量测试盒(酶标板法) |
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| Qty 1 |
100T/96S |
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| References | 游离胆固醇FC是构成细胞膜的主要成分，也是合成肾上腺皮质激素、性激素、胆汁酸及维生素D等生理活性物质的重要原料。FC浓度可作为脂代谢的指标。 测定原理： FC氧化酶催化FC生成4-胆甾烯酮和H2O2，过氧化物酶催化H2O2、4-氨基安替比林和酚生成红色醌类化合物，在500nm有吸收峰，其颜色深浅与FC含量成正比。 需自备的仪器和用品： 可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵/匀浆器、异丙醇、蒸馏水。 产品组成：
实验步骤： 注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。 2. 细菌、细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声2秒，间隔3秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。 3. 血清（浆）样本：直接测定。 二、试剂准备 1、提取液：自备异丙醇； 2、标准品：10 mg 胆固醇，临用前加入517μL 异丙醇，振荡溶解，即为50μmol/mL 的胆固醇标准溶液，再将其用异丙醇稀释为2μmol/mL 的标准品，待测。 三、测定步骤 1. 可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至500nm，蒸馏水调零。 2. 按需取出一定量的工作液，并在37℃水浴中预热30min，其余的4℃保存。 3. 样本测定： 1.5mL离心管/96孔板中加入下列试剂：
混匀，室温静置15min 后于500nm 下测吸光度，记为A 空白管、A 标准管、A 测定管。（空白管和标准管分别只需做1-2 个） 四、计算公式 1. 血清（浆）中FC 含量计算： FC 含量（μmol/dL）=C 标准液×（A 测定管-A 空白管）÷（A 标准管-A 空白管）×100 C 标准液：标准品浓度； 100：单位换算系数。 2. 组织中FC 含量计算： (1) 按样本蛋白浓度计算 FC 含量（μmol/mg prot）=C 标准液×（A 测定管-A 空白管）÷（A 标准管-A 空白管）×V 样总÷（Cpr×V 样总） (2) 按样本质量计算 FC 含量（μmol/g 质量）=C 标准液×（A 测定管-A 空白管）÷（A 标准管-A 空白管）×V 样总÷W C 标准液：标准品浓度； V 样总：加入提取液的体积； Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL； W：样本质量，g。 3. 细胞、细菌中FC 含量计算： FC 含量(μmol/104 cell)=C 标准液×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 样总÷500 C 标准液：标准品浓度； 500：细菌或细胞数量，500 万； V 样总：加入提取液的体积。 注意事项： 如果样本吸光值大于1.2，建议将样本用提取液稀释后进行测定。 本试剂盒仅供科研使用! |
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