您的位置:首页>>分析化学>>试剂盒>>HK21569-48S 游离胆固醇(FC)含量测试盒(可见分光光度法)
Cat. Number
HK21569-48S
Chemical Name
HK21569-48S 游离胆固醇(FC)含量测试盒(可见分光光度法)
Qty 1
50T/48S
References

游离胆固醇FC是构成细胞膜的主要成分,也是合成肾上腺皮质激素、性激素、胆汁酸及维生素D等生理活性物质的重要原料。FC浓度可作为脂代谢的指标。 


测定原理:

FC氧化酶催化FC生成4-胆甾烯酮和H2O2,过氧化物酶催化H2O2、4-氨基安替比林和酚生成红色醌类化合物,在500nm有吸收峰,其颜色深浅与FC含量成正比。


需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵/匀浆器、异丙醇、蒸馏水。


产品组成:

试剂名称规格保存条件
提取液液体×1 瓶(自备)常温
工作液液体×1 瓶2-8℃
标准品粉剂×1 支2-8℃


实验步骤:

注意:实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)

1. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心10min,取上清置冰上待测。

2. 细菌、细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声2秒,间隔3秒,总时间3min);然后8000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。

3. 血清(浆)样本:直接测定。

二、试剂准备

1、提取液:自备异丙醇;

2、标准品:10 mg 胆固醇,临用前加入517μL 异丙醇,振荡溶解,即为50μmol/mL 的胆固醇标准溶液,再将其用异丙醇稀释为2μmol/mL 的标准品,待测。

三、测定步骤

1. 可见分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至500nm,蒸馏水调零。

2. 按需取出一定量的工作液,并在37℃水浴中预热30min,其余的4℃保存。

3. 样本测定:

1.5mL离心管/96孔板中加入下列试剂:

试剂名称(uL)空白管标准管测定管
异丙醇50--
标准液-50-
待测上清--50
工作液
950950950

混匀,室温静置15min 后于500nm 下测吸光度,记为A 空白管、A 标准管、A 测定管。(空白管和标准管分别只需做1-2 个)

四、计算公式

1. 血清(浆)中FC 含量计算:

FC 含量(μmol/dL)=C 标准液×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)×100

C 标准液:标准品浓度;

100:单位换算系数。

2. 组织中FC 含量计算:

(1) 按样本蛋白浓度计算

FC 含量(μmol/mg prot)=C 标准液×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 样总÷(Cpr×V 样总)

(2) 按样本质量计算

FC 含量(μmol/g 质量)=C 标准液×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 样总÷W

C 标准液:标准品浓度;

V 样总:加入提取液的体积;

Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;

W:样本质量,g。

3. 细胞、细菌中FC 含量计算:

FC 含量(μmol/104 cell)=C 标准液×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)×V 样总÷500

C 标准液:标准品浓度;

500:细菌或细胞数量,500 万;

V 样总:加入提取液的体积。


注意事项:

如果样本吸光值大于1.2,建议将样本用提取液稀释后进行测定。


本试剂盒仅供科研使用!

在线咨询 联系方式 二维码

服务热线

021-60498804

扫一扫,关注我们