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| Cat. Number | HK21561-48S |
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| Chemical Name | HK21561-48S 乙酰胆碱酯酶(AchE)测试盒(可见分光光度法) |
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| Qty 1 |
50T/48S |
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| References | 乙酰胆碱酯酶AchE属于丝氨酸水解酶，广泛存在于各种动物组织和血清中。AchE催化乙酰胆碱（Ach）水解，在神经传导调节中起重要作用。 测定原理： AchE催化Ach水解生成胆碱，胆碱与二硫对硝基苯甲酸（DTNB）作用生成5-巯基-硝基苯甲酸（TNB）；TNB在412nm处有吸收峰，通过测定412 nm吸光度增加速率，计算AchE活性。 需自备的仪器和用品： 可见分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、蒸馏水。 产品组成：
实验步骤： 注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液）进行冰浴匀浆，8000g 4℃离心10min，取上清液待测。 2. 细菌、细胞：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3 秒，间隔7 秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。 3. 血清等液体：直接测定。 二、试剂准备 1. 试剂R2：临用前加入5.2 mL 试剂R1充分震荡溶解； 2. 试剂R3：临用前加入5.2 mL 试剂R1充分震荡溶解； 3. 试剂R4：临用前加入5 mL 蒸馏水充分溶解，备用。 三、测定步骤： 1. 可见分光光度计预热30min以上，调节波长至412nm，蒸馏水调零。 2. 样本测定：
四、AchE 酶活计算公式 A、用微量玻璃比色皿测定计算公式： 1. 组织AchE 活性 （1） 按照蛋白浓度计算 活性单位定义：每毫克蛋白每分钟催化产生1nmol TNB 为1 个酶活单位。 AchE 酶活(U/mg prot)=[ΔA÷（ε×d）×V 显色×109] ÷（Cpr ×V 样×V 上清÷V 酶促）÷T （2） 按照样本质量计算 活性单位定义：每克组织每分钟催化产生1nmol TNB 为1 个酶活单位。 AchE 酶活(U/g 质量)=[ΔA÷(ε×d）×V 显色×109]÷（W ×V 样÷V 样总×V 上清÷V 酶促）÷T 2. 细菌、细胞AchE 活性 活性单位定义：每104 个细胞每分钟催化产生1nmol TNB 为1 个酶活单位。 AchE 酶活(U/104 cell)=[ΔA÷(ε×d）×V 显色×109]÷（细胞数量×V 样÷V 样总×V 上清÷V 酶促）÷T 3. 血清AchE 活性 活性单位定义：每毫升血清每分钟催化产生1nmol TNB 为1 个酶活单位。 AchE 酶活(U/mL)= [ΔA÷(ε×d）×V 显色×109]÷（V 样×V 上清÷V 酶促）÷T ε：TNB 摩尔消光系数，13.6×103L/mol/cm； d：比色皿光径，1cm； V 显色：显色反应体系总体积（L）； 109：单位换算系数，1mol=1×109nmol； V 酶促：酶促反应总体积； V 上清：吸取上清液体积； V 样总：加入提取液体积； Cpr：蛋白浓度，mg/mL； W：样本质量，g； V 样：加入样本体积（mL）； T：反应时间（min），5min； 细胞数量：提取时的细胞数量，万个。 B、用96 孔板测定的计算公式： 将上述公式中的d-1cm 改为d-0.6cm 进行计算即可。 注意事项： 1.测定过程中样本和工作液在冰上放置，以免变性和失活。 2.当吸光值大于1 时，建议将样本稀释后测定。 本试剂盒仅供科研使用! |
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