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| Cat. Number | HK21558-96S |
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| Chemical Name | HK21558-96S 乙醛脱氢酶(ALDH)测试盒(酶标板法) |
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| Qty 1 |
100T/96S |
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| References | 乙醛脱氢酶 (EC 1.2.1.10)是醛脱氢酶的一种，广泛存在于各种动物、植物和微生物体内。主要作用是将乙醛氧化成乙酸，在酒精代谢中起主要作用。在人类和许多动物体内，线粒体乙醛脱氢酶能把对生物体有害的醇类转化，所以在细胞解毒研究中乙醛脱氢酶受到高度关注；同时，乙醛脱氢酶在分子生物学以及相关疾病的检测方面有较广泛的研究应用。 测定原理： 在辅酶Ⅰ存在的条件下，乙醛脱氢酶催化乙醛和NAD+转化为乙酸和NADH，在340nm处的吸光值会增加，测定340nm处的吸光值变化，可计算得到乙醛脱氢酶的活性。 需自备的仪器和用品： 紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、微量石英比色皿/96孔UV板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。 产品组成：
实验步骤： 注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃，离心20min，取上清置于冰上待测。 细胞：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细胞加入1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3 秒，间隔7 秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心20min，取上清置于冰上待测。 液体：直接检测。 二、试剂准备 1、试剂R2：临用前加入3 mL 蒸馏水溶解，-20℃分装保存； 2、试剂R5：沸点低，在使用时保持低温以保证正确的吸取量。 三、测定步骤 1、紫外分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。 2、将试剂R1 37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）预热15min。 3、操作表：
四、ALDH酶活计算 A 按微量石英比色皿计算： 1. 按蛋白浓度计算 酶活定义：每毫克蛋白每分钟生成1nmol的NADH定义为1个酶活单位。 ALDH酶活（U/mg prot）=ΔA÷（ε×d）×109×V反总÷（V样×Cpr）÷T 2. 按样本质量计算 酶活定义：每克样本每分钟生成1nmol的NADH定义为1个酶活单位。 ALDH酶活（U/g 质量）=ΔA÷（ε×d）×109×V反总÷（V样×W÷V样总）÷T 3. 按细胞数量计算 酶活定义：每104个细胞每分钟生成1nmol的NADH定义为1个酶活单位。 ALDH酶活（U/104 cell）=ΔA÷（ε×d）×109×V反总÷（V样÷V样总×细胞数量（万个））÷T 4. 按液体体积计算 酶活定义：每mL样本每分钟生成1nmol的NADH定义为1个酶活单位。 ALDH酶活（U/mL）=ΔA÷（ε×d）×109×V反总÷V样÷T ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103 L/mol/cm； d：比色皿光径，1cm； V反总：反应体系总体积； V样：反应体系中样本体积； V样总：提取液体积；Cpr： 样本蛋白浓度，mg/mL，需自行测定； W：样本质量，g； T：反应时间，1min； 109：单位换算系数，1mol=109nmol。 B 按96孔UV板计算： 将上述公式中的d-1cm改为d-0.6cm（96孔UV板光径）进行计算即可。 注意事项： 1、空白管为检测各试剂组分质量的检测孔，正常情况下，其OD 值不超过0.3，变化不超过0.01。 2、ΔA 大于1 时，建议将样本稀释后再进行测定。当ΔA 小于0.01 时，可以延长反应时间（5min 或10min）来测定。 本试剂盒仅供科研使用! |
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