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| Cat. Number | HK21556-96S |
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| Chemical Name | HK21556-96S 果胶酯酶测试盒(电位滴定法) |
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| Qty 1 |
100T/96S |
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| References | 果胶酯酶（Pectinesterase，PE），又称果胶甲基酯酶、果胶氧化酶，广泛存在于植物及微生物中。果胶是构成植物细胞壁的主要成分之一，而果胶酯酶催化果胶的甲氧酯水解产生果胶酸和甲醇，在植物果实成熟的细胞壁代谢过程中发挥着重要作用，在食品工业中具有极其重要的作用和开发前景。 测定原理： 果胶酯酶催化果胶水解的过程中释放H+，反应体系pH值降低，通过加入碱液维持反应体系pH始终维持在7.8维持pH所消耗的碱液量可反映果胶酯酶的活性。 需自备的仪器和用品： 低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、天平、研钵/匀浆器、10mL离心管或试管、容量瓶、冰和蒸馏水。 产品组成：
实验步骤： 注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果试剂R3工作液消耗量过大或过小，建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理 1、将研钵/匀浆器与提取液置于冰上或4℃预冷10min。 2、按照样本质量（g）：提取液体积（mL）=1:3~5 的比例（建议称取约0.5g 样本，加入1.5mL 提取液）加入提取液，冰浴匀浆后，于4℃，12000g 离心10min，弃沉淀，取全部上清液置于冰上待测。 二、试剂准备 1、提取液：临用前取1 瓶加入100 mL 蒸馏水，充分溶解；用不完的试剂4℃避光可保存3 个月； 2、试剂R1：临用前加入100mL 蒸馏水，磁力搅拌50℃加热溶解3小时左右至完全溶解，转移至500mL 容量瓶，蒸馏水定容至500mL；用不完的试剂4℃可保存8 周；（因试剂R1较难配制，建议客户提前制备） 3、试剂R3工作液：临用前根据样本量取出部分试剂R3，用蒸馏水稀释16 倍得到试剂R3工作液备用，现配现用，用不完的试剂4℃可保存1 周； 三、测定步骤 1、将试剂R1置于37℃水浴锅中保温10min以上。 2、依次在10mL离心管或试管中加入1mL上清液、25μL试剂R2和4mL试剂R1，充分混匀，用试剂R3工作液调节pH至7.8（粉红色）。 3、将上述离心管或试管置于37℃恒温培养箱/水浴锅中准确反应60min，每隔20min用试剂R3工作液调节pH，使其维持在7.8（粉红色），并记录下所消耗试剂R3工作液的体积，记为V（mL）。 四、果胶酯酶活性计算 酶活单位定义：每g组织样本每分钟消耗1μmol NaOH的量为一个酶活力单位。 PE活性（U/g 质量）=25×V÷V上清×V提÷W÷T×F V：消耗试剂R3工作液的体积，mL； V上清：加入的上清液体积； V提：加入的提取液体积； W：样本质量，g； T：反应时间，60min； F：稀释倍数。 注意事项： 1、实验中酶促反应产生H+，此时溶液无色透明，需用试剂R3调节pH 到7.8（粉红色），即溶液会从无色透明突然变为粉红色。 2、建议正式实验前进行预实验，其中测定步骤2 中，将样本上清液、加入试剂R2和试剂R1混匀后，用试剂R3工作液调节pH 至7.8（粉红色）时，可适当调整每次加入试剂R3工作液的体积，防止pH 调过。 3、若样本酶活性较高，可适当稀释样本上清液后再进行测定，计算酶活时乘以稀释倍数即可。若样本酶活性较低，建议客户加大样本量后重新进行测定，注意同步修改计算公式。 本试剂盒仅供科研使用! |
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