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| Cat. Number | HK21554-96S |
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| Chemical Name | HK21554-96S 乙醇酸氧化酶(GO)测试盒(酶标板法) |
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| Qty 1 |
100T/96S |
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| References | 乙醇酸氧化酶（EC1.1.3.15）是乙醇酸循环中的一种酶，也是植物光呼吸代谢中的关键酶，催化乙醇酸氧化生成乙醛酸，通过测定乙醇酸氧化酶活性，可以了解植物光合和呼吸代谢的基本方法。 测定原理： 乙醇酸氧化酶催化乙醇酸氧化生成乙醛酸，乙醛酸和盐酸苯肼反应生成乙醛酸苯腙，在324nm 有特征吸收峰。 需自备的仪器和用品： 紫外分光光度计/酶标仪、低温离心机、可调式移液枪、微量石英比色皿/96孔板UV板、天平、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。 产品组成：
实验步骤： 注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃，离心10min，取上清置冰上待测。 细胞或细菌：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3 秒，间隔7 秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。 二、试剂准备 1、试剂R2：临用前加入2.5 mL 双蒸水溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。 三、测定步骤 1. 紫外分光光度计/酶标仪预热30min 以上，调节波长至324nm，紫外分光光度计蒸馏水调零。 2. 将试剂R1 25℃预热15min。 3. 样本测定：在微量石英比色皿/96孔UV板中分别加入下列试剂：
四、GO 酶活计算 1、按微量石英比色皿计算： （1）按蛋白浓度计算 酶活定义：每毫克蛋白每分钟生成1nmol 乙醛酸苯肼所需的酶量为一个酶活力单位。 GO 酶活（U/mg prot）=ΔA÷(ε×d)×V 反总×109÷(V 样×Cpr)÷T （2）按样本质量计算 酶活定义：每克组织每分钟生成1nmol 乙醛酸苯肼所需的酶量为一个酶活力单位。 GO 酶活（U/g 质量）=ΔA÷(ε×d)×V 反总×109÷(V 样×W÷V 样总)÷T （3）按细胞数量计算 酶活定义：每万细胞每分钟生成1nmol 乙醛酸苯肼所需的酶量为一个酶活力单位。 GO 酶活（U/104 cell）=ΔA÷(ε×d)×V 反总×109÷(V 样×500÷V 样总)÷T ε：乙醛酸苯腙毫摩尔消光系数：17000L/mol/cm； d：比色皿光径，1cm； V 反总：反应总体积； V样：反应中样本体积； V 样总：加入提取液体积； Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL，蛋白浓度自行测定； W：样本质量，g； T：反应时间，3min； 500：500 万个细胞； 109：单位换算系数，1mol=109nmol。 2、按96 孔UV 板计算： 将上述公式中的d-1cm 改为d-0.6cm（96 孔UV 板光径）进行计算即可。 注意事项： 1、测定之前进行预实验，若吸光值A1>1，请将样本用提取液进行适当的稀释再测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。 2、色素含量较高的样本，可在提取酶时加活性炭吸附。 3、空白管为检测各试剂组分质量的检测孔，正常情况下，其OD 值变化不超过0.02。 本试剂盒仅供科研使用! |
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