HK21548-48S 亚硝酸还原酶(NiR)测试盒(酶标板法)_上海惠诚生物生物试剂,标准品,仪器设备,耗材,一站式服务

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Cat. Number

HK21548-48S

Chemical Name

HK21548-48S 亚硝酸还原酶(NiR)测试盒(酶标板法)

Qty 1

100T/48S

References

亚硝酸还原酶（Nitrite reductase，NiR）是亚硝态氮还原过程中的关键酶，在自然界氮素循环过程中发挥着重要作用，其广泛存在于微生物及植物体内，能够催化亚硝酸盐还原，减少亚硝态氮在环境中的积累，降低其对生物体生长发育的毒害作用。

检测原理：

亚硝酸还原酶可将NO₂^-还原为NO，使样本中参与重氮化反应生成紫红色化合物的NO₂^-减少，即540nm处吸光值的变化可反应土壤中亚硝酸还原酶的活性。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、天平、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

产品组成：

实验步骤：

注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1. 组织：按样本质量（g）: 提取液体积（mL）1 : 5~10 比例（建议称取0.1g 样本，加入1.0mL 提取液）加入提取液，冰浴匀浆后，于4 ℃，10000g，离心10min，弃沉淀，取上清液置于冰上待测。

2. 细菌或细胞：按细胞数量（104）：提取液体积（mL）500~1000 : 1 的比例（建议500 万细胞加入1.0mL 提取液）加入提取液，冰浴超声破碎细胞（功率200w，超声3s，间隔7s，总时间3min），然后于4℃，10000g，离心10min，弃沉淀，取上清液置于冰上待测。

二、试剂准备

1、试剂R2：每瓶临用前加入2.5mL 蒸馏水充分溶解，2-8℃保存2 周；

2、试剂R3：临用前加入5mL 蒸馏水，可70-80℃加热溶解；2-8℃可以保存3 个月

3、试剂R5：若出现沉淀，可70-80℃加热溶解；

4、标准品：10μmol/mL 亚硝酸钠标准溶液；

5、工作液：临用前根据样本量将试剂R4和试剂R5按1:1 的比例混合，现用现配。

三、测定步骤

1、分光光度计/酶标仪预热30min 以上，调节波长至540nm，分光光度计蒸馏水调零。

2、标准液的稀释：将10μmol/mL的标准溶液用蒸馏水等比稀释至0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125μmol/mL标准溶液待测。备注：实验中每个标准管需70μL 标准溶液。

3、样本测定：

试剂名称（μL）	基质管	对照管	测定管	标准管	空白管
样本	-	20	20	-	-
蒸馏水	20	40	-	-	-
试剂R1	40	-	40	-	-
试剂R2	40	40	40	-	-
	混匀后，25℃反应1h
试剂R3	40	40	40	-	-
	充分震荡30s，常温静置5min，取上清
上清液	70	70	70	-	-
标准品	-	-	-	70	-
蒸馏水	-	-	-	-	70
工作液	140	140	140	140	140
充分混匀，常温静置5min，于微量玻璃比色皿或96孔板中测定540nm各管吸光值，分别记为A基质管、A对照管、A测定管、A标准管和A空白管，计算ΔA测定=A基质管-（A测定管-A对照管），ΔA标准=A标准管-空白管。空白管、标准管和基质管只需测1-2次，每个测定管需设一个对照管。