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Cat. Number

HK21545-24S

Chemical Name

HK21545-24S 硝酸还原酶(NR)测试盒(可见分光光度法)

Qty 1

50T/24S

References

硝酸还原酶NR（EC 1.7.1.3）广泛存在于植物中，是植物硝态氮转化为氨态氮的关键酶，也是诱导酶，对作物的产量和品质有影响。

检测原理：

NR 催化硝酸盐还原为亚硝酸盐，NO₃ˉ +NADH+H＋→NO₂ˉ+NAD＋+H2O。在酸性条件下，产生的NO₂ˉ能够参与重氮化反应生成紫红色化合物，这种紫红色化合物在540nm处有吸收峰，540nm下吸光值的变化即可表示酶活。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

产品组成：

实验步骤：

注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、组织前处理：

（1）取适量诱导液于烧杯中，将新鲜标本洗净，滤纸吸干，放入诱导液中（淹没即可），避光浸泡2 h，取出样本，滤纸吸干后，-20℃冷冻30 min，取出样本，滤纸吸干。（根据需要进行诱导处理，一般不需要诱导处理，预实验结果没有活性则需要进行诱导处理）

（2）按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为1:5~10 的比例(称取约0.1 g 样本，加入1 mL 提取液)，冰浴研磨，8000g，4℃离心10 min，取上清置冰上待测。

2、细胞或细菌的前处理：

先收集细胞或细菌样本到离心管内，弃上清，按照每500 万细胞或细菌加入1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率200W，超声3s，间隔10s，重复30 次）。8000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

二、试剂准备

1、诱导液：将诱导剂储备液用蒸馏水20 倍稀释后使用，即取10 mL 诱导剂储备液加90 mL 蒸馏水，充分混匀。现配现用。

2、试剂R2：加入1mL 蒸馏水，-20℃分装保存，可以-20℃保存2 周。临用前用蒸馏水将试剂R2稀释50倍，备用，即取10μL 试剂R2加入490 μL 蒸馏水混匀。

3、标准品：10 μmol/mL 亚硝酸钠标准溶液。临用前将用蒸馏水标准溶液稀释100 倍得到0.1μmol/mL 的亚硝酸钠标准液，备用。

三、测定步骤

1、可见分光光度计预热30 min以上，调节波长至540 nm，蒸馏水调零。

2、样本测定：

试剂名称(uL)	测定管	对照管	标准管	空白管
样本	100	100	-	-
标准溶液	-	-	100	-
蒸馏水		375		475
试剂R	375	-	375	-
试剂R	125	125	125	125
混匀，37℃(哺乳动物)/25℃(其他物种)反应30 min
试剂R	250	250	250	250
试剂R	250	250	250	250
混匀，室温显色20 min，测定540nm下的吸光度，分别记为A测定、A对照、A标准、A空白。