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| Cat. Number | HK21524-9S |
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| Chemical Name | HK21524-9S 酰基转移酶(AAT)测试盒(可见分光光度法) |
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| Qty 1 |
10T/9S |
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| References | 酰基转移酶AAT是一个多功能蛋白大家族，主要负责催化生物体内各种酰基化和去酰基化反应，在基因表达、代谢和信号传导中具有重要作用。 需自备的仪器和用品： 可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。 产品组成：
实验步骤： 注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 组织样本：称取约0.1g 样本加提取液1mL，冰上充分研磨，15000g 4℃离心20min，上清液待测。 血清（浆）样本：直接检测。 二、试剂准备 1、提取液：内含不溶物，使用前摇匀； 2、试剂R2：临用前加蒸馏水0.6 mL 充分溶解，4℃保存； 3、试剂R4：临用前加入试剂R1 0.6 mL 充分溶解，4℃避光保存。 三、测定步骤 1、分光光度计预热30min 以上，调节波长至412nm，蒸馏水调零。 2、试剂R1在37℃水浴保温20 min以上。 3、样本测定：
将上述试剂按顺序加入1mL 玻璃比色皿中，加试剂四的同时开始计时，在412nm 波长下记录10s 时的初始吸光度A1 和130s 后的吸光值A2，计算ΔA 空=A2空-A1空；ΔA 测=A2测-A1测，ΔA=ΔA测-ΔA空。 四、AAT活性计算 A、使用微量石英比色皿测定的计算公式如下： 1、按样本蛋白浓度计算 单位的定义：37℃中每mL反应体系下每毫克蛋白每分钟催化吸光值变化0.001个单位为1个酶活单位。 AAT (U/mg prot) =ΔA÷0.001÷(Cpr×V样) ÷T×（V反总÷1） 此法需要自行测定样本蛋白质浓度。 2、按样本质量计算 单位的定义：37℃中每mL反应体系下每克组织每分钟催化吸光值变化0.001个单位为1个酶活单位。 AAT (U/g 质量) =ΔA÷0.001÷(V样÷V样总×W) ÷T×（V反总÷1） 3、按血清浓度计算 单位的定义：37℃中每mL反应体系下每mL血清每分钟催化吸光值变化0.001个单位为1个酶活单位。 AAT (U/mL 血清) =ΔA÷0.001÷V样÷T×（V反总÷1） Cpr：上清液蛋白浓度，mg/mL； V样：加入反应体系中上清液体积； W ：样本质量，g； V样总：提取液体积； T：反应时间； V反总：反应总体积； 1：每mL反应体系。 B、使用96孔板测定的计算公式如下： 1、按蛋白浓度计算 AAT活力单位定义：37℃中每mL反应体系下每毫克蛋白每分钟催化吸光值变化0.001个单位为1U。 AAT (U/mg prot) =ΔA÷0.001÷(Cpr×V样) ÷T×（V反总÷1） 2、按样本质量计算 AAT活力单位定义：37℃中每mL反应体系下每克组织每分钟催化吸光值变化0.0005个单位为1U。 AAT (U/g 质量) =ΔA÷0.001÷(V样÷V样总×W) ÷T×（V反总÷1） 3、按血清浓度计算 单位的定义：37℃中每mL反应体系下每mL血清每分钟催化吸光值变化0.0005个单位为1U。 AAT (U/mL 血清) =ΔA÷0.001÷V样÷T×（V反总÷1） Cpr：上清液蛋白浓度，mg/mL，蛋白质浓度需要另外测定； V样：加入反应体系中上清液体积； W：样本质量，g； V样总：提取液体积； T：反应时间，2min； V反总：反应总体积； 1：每mL反应体系。 注意事项： 1、上清液蛋白质含量需要另外测定。 2、当吸光值大于1时，建议稀释后测量。 3、如果ΔA测偏低，可以延长反应时间，如测定10s和310s的吸光度，相应修改计算公式中反应时间。 本试剂盒仅供科研使用! |
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