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| Cat. Number | HK21522-24S |
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| Chemical Name | HK21522-24S 纤维素酶(CL)测试盒(可见分光光度法) |
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| Qty 1 |
50T/24S |
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| References | 纤维素酶（CL）是一类能够将纤维素降解为葡萄糖的多组分酶系的总称，通过协同作用分解纤维中β-1,4-葡萄糖苷键，使其转变为纤维二糖和寡糖，最终水解为葡萄糖，能够为微生物提供可优先利用的碳源营养物质，在食品、纺织、造纸和医药等领域具有广泛应用。 测定原理： 纤维素酶可催化纤维素降解产生还原糖，进一步与3,5-二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物，产物在540 nm处具有特征吸收峰，通过吸光值的变化即可表征纤维素酶的活性。 需要而未提供的试剂和器材： 可见分光光度计、水浴锅、低温离心机，可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。 产品组成：
实验步骤： 注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理 1、细菌或细胞：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液，超声冰浴破碎细 菌或细胞（功率 20％，超声 3S 秒，间隔 10S，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。 2、组织：称取约 0.1g 组织加入 1mL 提取液，冰浴中匀浆。8000g ，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。 二、试剂准备 标准品：10mg无水葡萄糖（干燥失重<0.2%)。临用前加入1mL蒸馏水溶解，配制成10mg/mL葡萄糖溶液备用，2-8℃保存两周，或者用饱和苯甲酸溶液溶解，可保存更长时间。 三、测定步骤 1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 540nm，用蒸馏水调零。 2、将标准品用蒸馏水稀释至 1、0.8、0.6、0.4、0.2、0.1、0mg/mL。备注：实验中每个标准管需50uL标准溶液。 3、加样表（在EP管中依次加入下列试剂):
四、活性计算 1、标准曲线的建立： 根据标准管的浓度（y，mg/mL）为纵坐标，吸光度 ΔA标准为横坐标，建立标准曲线。根据标准曲线，将 ΔA 带入公式中（x，ΔA）计算样品浓度（ y，mg/mL）。 2、按照蛋白浓度计算 单位的定义：每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。 CL 活力（U /mg prot）＝1000×y×V 反总÷（V 样×Cpr）÷T 3、按样本质量计算 单位的定义：每 g 组织在反应体系中每分钟催化产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。 CL 活力（U/g 质量）＝1000×y×V 反总÷（W×V 样÷V 样总）÷T 4、按细菌或细胞密度计算 单位的定义：每 1 万个细菌或细胞在反应体系中每分钟催化产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。 CL 活力（U/10⁴ cell）＝1000×y×V 反总÷（500×V 样÷V 样总）÷T 1000：单位换算系数，1mg/mL=1000μg/mL； V 反总：反应体系总体积； V 样：加入样本体积； V 样总：加入提取液体积； T：反应时间，30 min； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； W：样本质量，g； 500：细菌或 细胞总数，500 万。 本试剂盒仅供科研使用! |
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