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Cat. Number

HK21519-48S

Chemical Name

HK21519-48S 细胞壁不溶性酸性转化酶(B-AI)测试盒(酶标板法)

Qty 1

100T/48S

References

蔗糖转化酶（Invertase，Inv）不可逆的催化蔗糖裂解形成葡萄糖和果糖，在植物蔗糖代谢中发挥着重要作用。Inv根据最适pH，可分为酸性转化酶（AI）和中性转化酶（NI），其中AI 根据亚细胞定位的差异又可分为可溶性酸性转化酶（Soluble acid Invertase，SAI）和细胞壁结合酸性转化酶（Cell wall-bound acid Invertase，CWI）。 CWI以离子键的形式结合在细胞壁上，在“库”组织韧皮部蔗糖卸载、蔗糖质外运输、植物的生长发育以及抵抗各种胁

迫中起着重要作用。

测定原理：

细胞壁结合酸性转化酶CWI 催化蔗糖降解产生还原糖，还原糖与3,5 –二硝基水杨酸反应生成在540nm 有特征吸收峰的棕红色物质，通过测定540nm 处吸光值变化可计算得CWI 活性。

需要的仪器，耗材:

1、可见分光光度计/酶标仪

2、台式离心机

3、可调式移液器

4、微量石英比色皿/96孔板

5、研钵、冰和蒸馏水。

产品组成：

试剂名称	规格	保存条件
提取液1	液体×1 瓶	2-8℃
提取液2	液体×1 瓶	2-8℃
试剂R1	液体×1 瓶	2-8℃
试剂R2	粉剂×1 瓶	2-8℃
试剂R3	液体×1 瓶	2-8℃
标准品	粉剂×1 支	2-8℃

实验步骤：

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

组织：按照质量（g）：提取液一体积（mL）为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g，加入1mL 提取液一）加入提取液，冰浴匀浆后于4℃，12000g，离心10min，弃上清，留沉淀；沉淀中加入1mL 蒸馏水，充分震荡混匀，4℃，12000g 离心10min，弃上清，留沉淀；沉淀中加入1mL 提取液二，充分混匀，4℃浸提15h，4℃，12000g，离心10min，取上清置于冰上待测。

二、试剂准备

1、试剂R2：临用前加入试剂R1充分溶解备用；

2、标准品：10mg 葡萄糖，临用前加入 1mL 蒸馏水溶解，制备 10mg/mL 葡萄糖标准液备用，2-8℃保存一周。

三、测定步骤

1、分光光度计或酶标仪预热30min 以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。

2、标准品的制备：将标准液用蒸馏水稀释成2、1、0.8、0.6、0.5、0.4、0.3mg/mL 葡萄糖标准液。

3、操作表：（在1.5mLEP管中依次加入下列试剂）

试剂名称（μL）	测定管	对照管	标准管	空白管
样本	80	80	-	-
标准溶液	-	-	80	-
蒸馏水				80
试剂R1	320	-	320	320
试剂R2	-	320	-	-
混匀，37℃水浴30min后，95℃水浴10min（盖紧，以防止水分散失）
试剂R3	200	200	200	200
混匀，95℃水浴5 min（盖紧，防止水分散失），冷却至室温。
混匀，取200μL 置于微量玻璃比色皿/96 孔板中，测定540nm 处吸光值A，分别记为A 对照管，A 测定管，A标准管，A 空白管。计算ΔA=A 测定管-A 对照管，ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。每个测定管需设一个对照管（标准曲线只需检测1-2 次）。