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| Cat. Number | HK21513-48S |
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| Chemical Name | HK21513-48S 维生素B6测试盒(酶标板法) |
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| Qty 1 |
100T/48S |
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| References | 维生素B6（Vitamin B6）又称吡哆素，其包括吡哆醇、吡哆醛及吡哆胺，在体内以磷酸酯的形式存在，是一种水溶性维生素，肉类、全谷类、蔬菜和坚果类中含量较高。在机体中参与多种蛋白质和氨基酸的代谢，对生物体具有极其重要的作用。 测定原理： VB6与4-氨基安替比林在强氧化剂作用下生成稳定的黄色化合物，在400nm有特征吸收峰。 需自备的仪器和用品： 可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96 孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP管、冰和蒸馏水。 产品组成：
实验步骤： 注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 组织：将样本磨碎，按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g，加入0.6mL 提取液）加入提取液，60℃浸提30min，加蒸馏水0.4mL，混匀后于25℃，16000rpm 离心10min，取上清测定（动物组织及其他蛋白含量较高的样本建议离心20-30 分钟或反复离心2-3 次至上清无混浊）。 细胞或细菌：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细胞加入0.6mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3 秒，间隔7 秒，总时间3min）；加蒸馏水0.4mL，混匀后于25℃，16000rpm 离心10min，取上清测定。 液体：直接检测。 二、试剂准备 1、提取液：内含不溶物，使用前摇匀； 2、试剂R4：临用前加入10 mL 蒸馏水混匀，4℃保存一周，如果一次性用不完，可分装于-20℃保存待用； 3、标准品：10mg 维生素B6，临用前加入1 mL 试剂R1，配成10 mg/mL 的标准液。 三、测定步骤 1. 分光光度计/酶标仪预热30min 以上，调节波长至400nm，蒸馏水调零。 2. 将10mg/mL 标准液用试剂R1稀释为1、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625mg/mL 的标准溶液备用。 3. 操作表：在1.5mL 离心管或96 孔板中依次加入下列试剂
四、维生素B6 含量计算 1、标准曲线的绘制： 以各个标准溶液的浓度为x 轴，其对应的ΔA 标准为y 轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将ΔA 带入方程得到x（mg/mL）。 2、维生素B6 含量的计算： （1）按蛋白浓度计算： VB6（mg/mg prot）=x×V 提取÷（V 提取×Cpr） （2）按样本质量计算： VB6（mg/g 质量）=x×V 提取÷W （3）按照细胞数量计算： VB6（mg/104 cell）=x×V 提取÷细胞数量（万个） （4）按液体体积计算： VB6（mg/mL）=x×V 样÷V 样 V 提取：样本提取体积； V 样：加入的样本体积； Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL； W：样本质量，g。 注意事项： 1、如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。 2、蛋白浓度较高的样本，比如动物组织、豆类种子等，若显色完成后有沉淀产生，将样本稀释后再测定，在计算公式中乘以稀释倍数。 3、显色完成后立即进行测定，尽量保证反应时间一致。 本试剂盒仅供科研使用! |
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