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Cat. Number

HK21511-96S

Chemical Name

HK21511-96S 维生素B1含量测试盒(酶标板法)

Qty 1

100T/96S

References

维生素B1（Vitamin B1）又称硫胺素，以辅酶形式参与糖的分解代谢，在生物体能量代谢中有重要的作用。

测定原理：

VB1在碱性条件下还原铁氰化钾生成亚铁氰化钾，亚铁氰化钾与Fe3+在弱酸条件下生成普鲁士蓝，测定布鲁士蓝在704nm下的特征吸收峰，即可反映VB1的含量。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP管、冰和蒸馏水。

产品组成：

试剂名称	规格	保存条件
提取液	液体×1瓶	2-8℃
稀释液	液体×1瓶	2-8℃
试剂R1	液体×1瓶	2-8℃
试剂R2	液体×1瓶	2-8℃
试剂R3	液体×1瓶	2-8℃
试剂R4	液体×1瓶	2-8℃
试剂R5	液体×1瓶	2-8℃
标准品	粉剂×1支	2-8℃

实验步骤：

注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、组织：将样本磨碎，按照质量（g）：提取液体积（mL）为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g，加入0.6mL提取液）加入提取液，60℃浸提30min，加蒸馏水0.4mL，混匀后于25℃，13000g 离心10min，取上清测定（动物组织、豆类种子等蛋白含量较高的样本建议离心20-30 分钟或反复离心2-3 次至上清无浑浊）。

2、细胞：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细胞加入0.6mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3 秒，间隔7 秒，总时间3min）；加蒸馏水0.4mL，混匀后于25℃，13000g 离心10min，取上清测定。

3、液体：直接检测。

二、试剂准备

1、提取液：内含不溶物，使用前摇匀；

2、标准品：10mg 维生素B1。临用前加入1mL 稀释液，配成10mg/mL（即10000μg/mL）的标准液。

三、测定步骤

1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至704nm，蒸馏水调零。

2、将10mg/mL（10000μg/mL）标准液用稀释液稀释为250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125μg/mL的标准溶液备用。

3、操作表（在1.5mL EP管中进行下列操作）：

试剂名称（uL）	测定管	标准管	空白管
样本	25	-	-
稀释液	-	-	25
标准品溶液	-	25	-
试剂R1	20	20	20
试剂R2	25	25	25
充分混匀，80℃水浴反应30min。
试剂R3	20	20	20
试剂R4	55	55	55
试剂R5	30	30	30
蒸馏水	75	75	75
充分混匀，反应5min，吸取200μL 于微量玻璃比色皿或96 孔板中测定704nm处吸光值A，计算ΔA=A测定管-A 空白管，ΔA 标准=A 标准管-A 空白管（空白管只需做1-2 次）。