服务热线
021-60498804
| Cat. Number | HK21507-96S |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Chemical Name | HK21507-96S 脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)活性测试盒(酶标板法) |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Qty 1 |
100T/96S |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| References | 脱氢抗坏血酸还原酶（Dehydroascorbate reductase，DHAR）是植物体内一种重要的抗氧化酶，是抗坏血酸-谷胱甘肽氧化循环中促进抗坏血酸再生的关键酶。DHAR 在循环中利用抗坏血酸维持植物体内抗坏血酸的正常代谢水平，保护细胞组分抵御氧化损伤方面发挥着重要作用。 测定原理: 需自备的仪器和用品： 研钵/匀浆器、冰、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、微量玻璃比色皿/96 孔板、可调式移液器和蒸馏水。 产品组成：
实验步骤： 注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）1：5-10的比例（建议称取约0.1 g 组织，加提取液1 mL），冰上充分研磨匀浆，8000 g，4℃，离心10 min，取上清液置于冰上待测。 2. 细菌、细胞：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为500-1000：1 的比例（建议500 万细胞加入1mL 提取液），冰浴超声破碎细胞（功率300w，超声3s，间隔7s，总时间3 min）；然后8000 g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。 3. 血清等液体：直接检测。 二、试剂准备 1、试剂R2：临用前加入3mL 蒸馏水充分溶解，用不完的试剂-20℃分装保存2 周。 2、试剂R3：粉剂置于试剂瓶内EP 管中。临用前加入3.5mL 蒸馏水充分溶解，4℃保存。 3、标准品：临用前加入1 mL 蒸馏水，配制成10 mg/mL 的标准溶液。 三、测定步骤 1、分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到412nm，蒸馏水调零。 2、标准溶液的配制：将10mg/mL 标准液用蒸馏水稀释为0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625 mg/mL的标准溶液备用。 3、加样表
四、DHAR 活性计算 1、标准曲线的绘制：以各个标准溶液的浓度为x 轴，其对应的ΔA 标准为y 轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将ΔA 带入方程得到x（mg/mL）。 2、DHAR 活性的计算： （1）按蛋白浓度计算： 酶活定义：每毫克蛋白每分钟催化1μg GSH 氧化为1 个酶活力单位。 DHAR (U/mg prot) = x×V 提取÷（V 提取×Cpr）×103÷T （2）按样本质量计算： 酶活定义：每克样本每分钟催化1μg GSH 氧化为1 个酶活力单位。 DHAR (U/g 质量) = x×V 提取÷W×103÷T （3）按细胞数量计算： 酶活定义：每104 个细胞（细菌）每分钟催化1μg GSH 氧化为1 个酶活力单位。 DHAR (U/104 cell) = x×V 提取÷细胞数量（万个）×103÷W÷T （4）按血清等液体计算： 酶活定义：每mL 样本每分钟催化1μg GSH 氧化为1 个酶活力单位。 DHAR（U/mL）= x×V 样÷V 样×103÷T V 提取：提取液体积，1mL； 103：单位换算系数，1mg=103μg； Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL，蛋白浓度自行测定； W：样本质量，g； T：反应时间：20min； V 样：加入样本体积，0.02mL。 本试剂盒仅供科研使用! |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Copyright © 2022 上海惠诚生物科技有限公司
沪ICP备2021037845号-6
